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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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bolomeer

铜虫 (小有名气)

[交流] 质粒提取 已有8人参与

我质粒的大小是5368bp，为什么质粒提取后电泳条大这么不在5368bp，而落在更大的条带？为什么两次酶切都出现降解？从电泳图谱看我的实验算不算成功，如果不成功的话，还有哪些需要改进的地方？

质粒条带



酶切条带
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1楼 2012-07-11 21:02:24
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sadc

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 呵呵，好全面的分析哇 2012-07-13 16:04:38
太多问题了：
1. 提的质粒，蛋白污染特别严重，上样孔那么亮，这可能都要直接干扰酶切了；
2. 质粒没有酶切前，跑出来的大小肯定和线性的Marker大小不一样的，通常有比较明显的3条带；
3. 酶切的质粒浓度太低了，5k多的质粒，这样淡，一是不好分析，二是往下做连接什么的都会很困难；
4. 把凝胶成像仪擦擦干净，电泳buffer换换，太脏了；
5. 电泳跑的时间太长了，明显已经分开了，还猛跑，全歪了；
还有，不想再找了~
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7楼2012-07-12 21:43:37
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-07-12 13:55:20
第一张图：点样孔比较亮，可以看出应该是有蛋白质污染，可以测测A260/A280，估计比值在1.8以下，手工提的吧？提的质量不太好，建议换试剂盒提，或者重新提一次.
第二张图：最右边泳道是mark吧，酶切体系是多少，质粒加了多少，量太少了，基本看不出酶切结果，建议加大质粒量酶切，电泳图太模糊了.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-12 09:16:43
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applexixixi

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-12 13:55:32
第一张图靠近点样孔的是蛋白，手工提的质粒都难免，我每次提再怎么细心也有蛋白条带。
第二张酶切的图，是单酶切还是双酶切？看位置不像在5kb附近，而且条带太浅。
楼主的图为什么这么不清楚呢？是胶不干净吗，还是有气泡，视觉效果很不好，应该改进一下
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3楼2012-07-12 09:34:47
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windsor2011

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒纯度低，重提。另外调整酶切体系
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只要功夫深铁杵磨成针
4楼2012-07-12 11:50:15
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