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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于碱性磷酸酶和ELISA的问题
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飘散的蒲公英

铁杆木虫 (初入文坛)

[求助] 关于碱性磷酸酶和ELISA的问题

大家好，请教一下关于碱性磷酸酶（ALP）的问题。
最近在用ALP做ELISA，发现ALP不能使用PBS作为缓冲液，因为PBS含有相对高浓度的磷离子，对碱性磷酸酶有很强的抑制作用，但是在ELISA中所使用的温育和洗涤缓冲液一般均含PBS，那应该用什么缓冲液和洗涤液呢？谢谢大家啦。。。
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1楼 2012-07-10 10:37:29
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happyjoe

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2012-07-10 17:15:41
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飘散的蒲公英

铁杆木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by happyjoe at 2012-07-10 17:15:41
想问一下，ALP底物有什么特征吗？需要必须含有酚羟基磷酸酯吗？？急求

碱性磷酸酶(ALP)是指一组底物特异性很低，在碱性环境中能水解很多磷酸单酯化合物的酶，需要镁和锰离子为激活剂。近年为认为ALP真正作用是将底物中磷酸基团转移到另一个含羟基基团化合物上。
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3楼2012-07-10 20:51:13
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happyjoe

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2012-07-11 08:41:49
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tianmaxk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
缓冲液可以用TBS，金属离子容易和磷酸盐生成沉淀。洗液可以用PBST。最近一直这么做。
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享受美丽人生
5楼2012-07-11 13:25:00
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sswisdomss

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
缓冲液可以用Tris-HCl缓冲液，一般是0.05M的浓度，pH中性就行，洗液的话用Tris-HCl加吐温20
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6楼2012-07-11 13:52:23
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MY那一天

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sswisdomss at 2012-07-11 13:52:23
缓冲液可以用Tris-HCl缓冲液，一般是0.05M的浓度，pH中性就行，洗液的话用Tris-HCl加吐温20

洗液的具体条件，多少浓度的Tris-Hcl,还需要别的试剂吗，能具体说一下吗，谢谢！
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7楼2017-06-29 10:24:35
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