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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

[交流] 基因敲除

向各位大侠请教一下基因敲除的知识噶。我是做真菌的基因敲除，这个丝状真菌是多核的，我使用原生质体介导进行同源替换的方法进行。我敲的这个基因验证了将近两百个转化子了，但是都是杂合子。也就是说可能只替换了部分核的DNA，没有实现全部核替换的纯合转化子。这个基因在我的课题中必须敲掉呢，所以很是伤心。请教各位同行给予指点啊，金币多多的送啊。
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1楼 2012-07-09 21:20:54
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
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linxi8579: 金币+1 2012-07-11 08:44:50
引用回帖:
7楼: Originally posted by linxi8579 at 2012-07-10 21:34:09
还要补充一点呢，有个很不好的现象是我们这个菌孢子里面也是多核呢，哎...

哪种真菌？孢子一般都是单核...你可以使用DAPI染色观察确认下...
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8楼2012-07-11 00:33:41
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凡子1985

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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linxi8579: 金币+8 2012-07-10 08:39:49
这个是个麻烦事 能不能用杂合子 换一个marker继续敲除呢 这样应该可以吧 或者诱导某个时期少核时进行敲除 真菌敲除还是挺容易操作
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2楼2012-07-09 23:47:48
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凡子1985 at 2012-07-09 23:47:48
这个是个麻烦事 能不能用杂合子 换一个marker继续敲除呢 这样应该可以吧 或者诱导某个时期少核时进行敲除 真菌敲除还是挺容易操作

用杂合子来敲除就要换一个抗性标记哈，这样好像是可行的，不过我的杂合子也表现出了不一样的表型，主要从生长速度和菌落形态来看，如果是这样的话就每种都选一下吧。这样倒是个好方法呢，我会试一下的，非常感谢您了。这个菌倒是不知道如何诱导少核呢，我先想想第一种方案吧
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3楼2012-07-10 08:39:36
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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linxi8579: 金币+3 2012-07-10 21:34:52
使用孢子进行遗传转化，可以避免该问题...
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4楼2012-07-10 12:27:09
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