应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因敲除
51/1返回列表
查看: 2812  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

[交流] 基因敲除

向各位大侠请教一下基因敲除的知识噶。我是做真菌的基因敲除，这个丝状真菌是多核的，我使用原生质体介导进行同源替换的方法进行。我敲的这个基因验证了将近两百个转化子了，但是都是杂合子。也就是说可能只替换了部分核的DNA，没有实现全部核替换的纯合转化子。这个基因在我的课题中必须敲掉呢，所以很是伤心。请教各位同行给予指点啊，金币多多的送啊。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-07-09 21:20:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-07-12 16:29:01
只要有一个核发生双交换，在选择压力下，反复生孢，传5代左右，再用PCR筛选试试...前提是双交换发生，而不是单交换...你应该设置为求助贴..

哦，好的，谢谢啦。传代的方法我倒是也考虑过呢，不过不同的杂合子表型也有不一样呢，是每一种都要选吗？
赞一下 回复此楼
17楼2012-07-12 22:00:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答

凡子1985

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
linxi8579: 金币+8 2012-07-10 08:39:49
这个是个麻烦事 能不能用杂合子 换一个marker继续敲除呢 这样应该可以吧 或者诱导某个时期少核时进行敲除 真菌敲除还是挺容易操作
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-09 23:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凡子1985 at 2012-07-09 23:47:48
这个是个麻烦事 能不能用杂合子 换一个marker继续敲除呢 这样应该可以吧 或者诱导某个时期少核时进行敲除 真菌敲除还是挺容易操作

用杂合子来敲除就要换一个抗性标记哈，这样好像是可行的，不过我的杂合子也表现出了不一样的表型，主要从生长速度和菌落形态来看，如果是这样的话就每种都选一下吧。这样倒是个好方法呢，我会试一下的，非常感谢您了。这个菌倒是不知道如何诱导少核呢，我先想想第一种方案吧
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-07-10 08:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
linxi8579: 金币+3 2012-07-10 21:34:52
使用孢子进行遗传转化，可以避免该问题...
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-10 12:27:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭