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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因敲除
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

[交流] 基因敲除

向各位大侠请教一下基因敲除的知识噶。我是做真菌的基因敲除，这个丝状真菌是多核的，我使用原生质体介导进行同源替换的方法进行。我敲的这个基因验证了将近两百个转化子了，但是都是杂合子。也就是说可能只替换了部分核的DNA，没有实现全部核替换的纯合转化子。这个基因在我的课题中必须敲掉呢，所以很是伤心。请教各位同行给予指点啊，金币多多的送啊。
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1楼 2012-07-09 21:20:54
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-07-11 12:48:36
把多核的文献发给我greatzhangtao@hotmail.com。2年不做真菌，或许有些知识我生疏了。我以前只做木霉。如果孢子多核，不行的话只能用RNAi。

关于我们这个菌的多核的文章我现在手上没有呢，多核的现象我们就是知道而已，是很多年前做鉴定的老科学家们的工作了。很多真菌都多核的，我们这个菌孢子也是多核。我想先试一下换个筛选标记对杂合子进行基因敲除看看吧。谢谢您啦。
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13楼2012-07-12 15:39:59
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凡子1985

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
linxi8579: 金币+8 2012-07-10 08:39:49
这个是个麻烦事 能不能用杂合子 换一个marker继续敲除呢 这样应该可以吧 或者诱导某个时期少核时进行敲除 真菌敲除还是挺容易操作
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2楼2012-07-09 23:47:48
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凡子1985 at 2012-07-09 23:47:48
这个是个麻烦事 能不能用杂合子 换一个marker继续敲除呢 这样应该可以吧 或者诱导某个时期少核时进行敲除 真菌敲除还是挺容易操作

用杂合子来敲除就要换一个抗性标记哈，这样好像是可行的，不过我的杂合子也表现出了不一样的表型，主要从生长速度和菌落形态来看，如果是这样的话就每种都选一下吧。这样倒是个好方法呢，我会试一下的，非常感谢您了。这个菌倒是不知道如何诱导少核呢，我先想想第一种方案吧
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3楼2012-07-10 08:39:36
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
linxi8579: 金币+3 2012-07-10 21:34:52
使用孢子进行遗传转化，可以避免该问题...
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4楼2012-07-10 12:27:09
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