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我是小纯洁

金虫 (正式写手)

[求助] PCR水污染已有1人参与

我用PCR做阳性苗筛选。加入以下试剂:
1.新开封的水
2.taq
3.taq buffer
4.dNTP
5.两条primer
跑出来的条带:
1.水有非常亮的条带
2.筛选的植株中有的没有条带

图片的marker是1kb plus。1号泳道是水对照,后面的均为植株DNA的PCR条带



请各位大神帮忙解答这是什么情况?



[ Last edited by 我是小纯洁 on 2012-7-9 at 19:21 ]
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

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★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我是小纯洁: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-10 22:33:43
最好把试剂都换掉重新做一次,明显是试剂污染的问题,水的话你不放心可以用娃哈哈纯净水,这个绝对靠谱,我们实验室用了很多次.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-07-10 09:27:31
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普通回帖

shenye.judy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-10 13:50:07
就是说阴性对照产物明显(确定条带位置正确的话),那就是你的试剂估计有污染了,是不是你们实验室一直在做这个基因,或者有别人一起在做。如果是污染的话,建议用一套新的,枪也换,可以去其他实验室做。
2楼2012-07-09 19:43:10
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孙启亮

金虫 (著名写手)

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感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-10 13:50:16
可能是你操作过程中的失误吧,恰巧了。只要片段大小是正确的话,我感觉楼主不需要太紧张。很可能是你操作过程中失误将水污染了
3楼2012-07-09 22:22:17
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蓝慧

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Marado at 2012-07-10 10:27:31
最好把试剂都换掉重新做一次,明显是试剂污染的问题,水的话你不放心可以用娃哈哈纯净水,这个绝对靠谱,我们实验室用了很多次.

娃哈哈纯净水?真的这么有用吗?
向着目标前进!
5楼2012-07-10 10:09:45
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)

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将所有试剂换新的,重新做。注意Tip头及移液器别污染。
6楼2012-07-10 11:29:19
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 蓝慧 at 2012-07-10 10:09:45
娃哈哈纯净水?真的这么有用吗?...

绝对有效,16s都P不出条带,娃哈哈我们实验室都用这个,不是打广告呦
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
7楼2012-07-10 11:35:06
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nemo88

禁虫 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-10 13:50:30
本帖内容被屏蔽

8楼2012-07-10 12:08:23
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我是小纯洁

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-07-09 22:22:17
可能是你操作过程中的失误吧,恰巧了。只要片段大小是正确的话,我感觉楼主不需要太紧张。很可能是你操作过程中失误将水污染了

貌似是气溶胶啊。。。
9楼2012-07-10 22:33:24
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我是小纯洁

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by nemo88 at 2012-07-10 12:08:23
是不是长期使用这对引物PCR相关基因
是的话就是气溶胶。。。
没条件的话换个环境做。。。或者用有滤膜的枪头,在超净台里试试

是啊。。其实这个基因是卡纳。每天做的菌里面都有啊。。
10楼2012-07-10 22:48:37
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