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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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nieyaru

新虫 (小有名气)

[交流] WB转膜问题 已有4人参与

我刚做WB，是大鼠发肝组织。电泳完感觉不错，转膜看膜上mark也挺清楚的，一抗是1:1000，二抗1:5000；但是曝光时候看到整个膜都是亮的，根本看不到条带，于是转完膜后用丽春红染了一下色，也染了胶，看了一下抹上条带感觉有点集中，分不清哪个是目的条带，胶上也觉得没转干净，做了好多次都是这样，发图大家给分析下是什么原因，有么有可能是我的蛋白不行啊 ？还是我的抗体浓度有问题
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1楼 2012-07-08 23:44:53
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xiaofeiyu1

银虫 (正式写手)
★
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根据不同的目的条带分子量选择合适浓度的胶，封闭时间可以长一些，降低二抗浓度
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不可再虚度时光！！
5楼2013-01-17 10:22:13
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houyuning

铜虫 (初入文坛)
★ ★
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缩++影: 金币+1, 欢迎到医学版块交流 2012-12-20 12:42:53
多少电压，转了多长时间，用的NC还是PVDF?
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2楼2012-12-18 13:32:03
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
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缩++影: 金币+1, 欢迎到医学版块交流 2012-12-20 12:42:59
增加转膜后用什么封闭的？BSA还是脱脂牛奶？适当增加封闭时间，提高一抗浓度，降低二抗浓度试试。祝成功。
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实验，实验，还是实验！
3楼2012-12-20 02:12:06
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hayaku

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
染一下膜再看，是否有清楚的条带，否则有可能蛋白降解了，也有可能离子浓度不正确，导致蛋白分离不好。
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4楼2012-12-20 21:14:51
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