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zhangjane694

金虫 (正式写手)

[求助] 核酸PAGE胶的诸多疑问,求助解答

最近需要做核酸非变性PAGE胶:我查了好多版本,但是众多不一。
1:   30% or 40%的聚丙烯酰胺?很多版本是用30%的,但是也有少数40%的版本,我还差了这里案中的区别,40%的是针对分离核酸的,30%的是针对分离蛋白的。有没有人给个权威说法?
2:   
0.5* or 1* TBE buffer?
不同的版本制胶跑胶用的TBE工作浓度不同。求解

今天做了一次,40%的聚丙烯酰胺,0.5*buffer,90v,30min,结果出来还可以,只是跑的不是很开。

对于这些版本的条件差别,我想知道原因.求明白人解答。万分感激!
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jane
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 应助指数+1, 要看丙烯酰胺和甲叉的比例 2012-07-31 16:04:01
二者只是交联程度不一样,而且,楼主需要根据你的目的选择变性和非变性。没有固定标准,只是40%用的多一些。
一般可以用1XTBE,离子强度大一点好一点。跑的不是很开,可以考虑换成长胶板。如果目标片段(300bp长度)差异大于5个bp是可以用非变性分开的,我做过2个bp的也可以分开(目标片段300以内)。如果差异太小,可以考虑用变性胶,可以分开1个bp的。
4楼2012-07-30 21:32:24
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普通回帖

zhangjane694

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
O(∩_∩)O谢谢
jane
2楼2012-07-30 08:46:43
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zhangjane694

金虫 (正式写手)

O(∩_∩)O谢谢
jane
3楼2012-07-30 08:47:18
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