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zhangjane694

金虫 (正式写手)

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[求助] 核酸PAGE胶的诸多疑问，求助解答

最近需要做核酸非变性PAGE胶：我查了好多版本，但是众多不一。
1: 30% or 40%的聚丙烯酰胺？很多版本是用30%的，但是也有少数40%的版本，我还差了这里案中的区别，40%的是针对分离核酸的，30%的是针对分离蛋白的。有没有人给个权威说法？
2：
0.5* or 1* TBE buffer?
不同的版本制胶跑胶用的TBE工作浓度不同。求解

今天做了一次，40%的聚丙烯酰胺，0.5*buffer，90v,30min,结果出来还可以，只是跑的不是很开。

对于这些版本的条件差别，我想知道原因.求明白人解答。万分感激！

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zhangjane694

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核酸PAGE胶的问题已经有6人回复

jane

1楼 2012-07-07 16:17:09

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chenguestc

木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 应助指数+1, 要看丙烯酰胺和甲叉的比例 2012-07-31 16:04:01

二者只是交联程度不一样，而且，楼主需要根据你的目的选择变性和非变性。没有固定标准，只是40%用的多一些。
一般可以用1XTBE，离子强度大一点好一点。跑的不是很开，可以考虑换成长胶板。如果目标片段（300bp长度）差异大于5个bp是可以用非变性分开的，我做过2个bp的也可以分开（目标片段300以内）。如果差异太小，可以考虑用变性胶，可以分开1个bp的。