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还是凝胶柱的问题
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本人菜鸟一个，实验室又没师兄师姐，老师又不教我，现在凝胶已经跑完一次了，该合的也都合了，之后就不知道怎么办了，有两个问题，1、是不是合完之后例如15-25瓶的东西直接再跑凝胶，跑完之后再合，然后再跑？2、我发现开全速上样和10s/d上样原始谱带的宽度不一样，开全速原始谱带能有3cm的样子，而慢慢的流的话原始谱带只有1cm，是不是上样时下面流慢一点好啊？ 谢谢大家 |
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zgzykxyygp
铜虫 (正式写手)
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是吗！要加油哦！是相当慢的了！这个问题要我一下讲清楚，比较困难，我能说的，你可能感觉也懂，但做起来就是不是那么回事！但我还是简单说下吧！ 1.分东西我觉得真的很简单（对于研究生传统分离--盲分），不需要什么太多基础（解谱例外，基本什么显色等要知道），认真思考很容易上手。 2.分离中要三心，用心，耐心，细心。用心分析怎么分离，比如，确定分离目标，选择什么方法分离（一般都是正相、反相（ods、HPLC)凝胶）,装柱要垂直，平整，湿法上扬溶剂尽可能少（我习惯干法装住、湿法上扬），洗脱条见要好，具体怎么摸索自己要体会思考了，这些多很重要，但也不一定若一次失误时就一定分离不好，不是绝对的；耐心就不说了，分离这个就那几个步骤，枯燥，不沉下心来行吗？至于心细，这相当重要了，想想一般新化合物量都很少mg级，一管搞在地上就完了，切不要边充柱子、不叫闹钟在哪看电影，一不小心就满了，损失、、、、、 3、分离目标的确定。这个对我来说相当重要。开始分离时，个数少，见到东西就要，自然简单，但值得一提到是目标的量，量多时怎么分，量少时，要考虑至少够结构鉴定吗（分子量200-300，个人经验觉得3-5mg可以的，这是分到的实际量）,若不够，分他干嘛，浪费时间。当你分到近30-40个时，及个数稍多时，你必须考虑分离目标是否与之前重合，所以，一开始，你就建立一个整体方案的检测方法，没分打一个按该条件检测一下，便于日后核对，这点我开就做的不好，以至于分到几个重的，但这不算在我的数目之内。 4.速度。除了上面这些基本的，再就是进度，几个组分同时搞。若一根柱子在哪分，哪搞毛啊，分到了还有点安慰，分不到就浪费时间了！--因此，需要几个同时分，比如，粗分与细分结合，这边在纯化，那边在粗粉，等这边纯化完，下一个纯化目标又来了；再就是重点目标与非重点目标结合，熟话说东边不亮西边亮，不至于浪费时间和抛弃某些非重点部分，比如某个组分点是肯定可以分到的，那么当做重点，这种一般分离思路很清晰，不需要考虑太多，程序分离（注意三心）就是了，对于那些量太少或目标太不明确，打算放弃继续分离但似乎还有机会分离得到目标物这时可以同时分离，这中分离，重点组分能完成进度，非重点部分分不到不影响整体进度，分到了那就更好了！ 注意，所谓的同时搞好几个组分要积分为二对待，不同时期仍无不一样，切记追求速度，不顾质量，我们的目的是得到更多的单体，而不只是将膏分完. 大概就说了这些，时间很紧，没仔细想太多，且是个人经验，再说不同的人不同的分离对象经验不一样，切勿拍砖，但愿意一起探讨！ 补充点：别人的只是别人的经验，切勿照搬，要具体分析，认真体会，适当的借鉴！我从开始一点也不会（装住都不会），没人代，都是跑到别人实验室看，但再向别人学习中，我不会盲目的套用@！ |
11楼2012-08-13 16:27:37
tianzeng21c
木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2012-07-05 23:30:52
感谢参与，应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2012-07-05 23:30:52
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1 楼主可先要搞明白凝胶柱的分离原理。 2 如果一个样品跑完一次凝胶后，若发现有分离效果，可以继续把该合的样品合并后再次上凝胶柱进行色谱；如果发现没有什么分离效果，那就不要再上了吧，可能凝胶柱的分离原理不适合你的样品。就考虑别的分离机理的填料。 3 凝胶柱色谱时，刚开始上样时，下面务必要慢慢地流，待你要分离的样品明显有分开的效果，如果带有颜色的话可看到，这时可适当提高柱子流速，毕竟，柱子流得太慢太耗时间了。 4 我们利用凝胶柱时，一般情况下，五六个小时让样品通过凝胶柱，这已经比较慢了，中间不要停，最慢当天也要跑完。 |
2楼2012-07-05 22:39:40
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3楼2012-07-09 15:00:59
lhg0209asd
银虫 (正式写手)
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4楼2012-07-09 15:36:18