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sherry325

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

11楼2012-11-19 10:16:58
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hellolin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2012-07-05 15:03:19
介个 你难道不是用试剂盒做的吗 我用的试剂盒激发波是488nm 发射波525左右 实验时波长段内扫描下就知道了 探针就是试剂盒里的东西
有的加入活性氧阳性对照试剂Rosup15-20min就可以检测发射荧光 有的要20-30min 具 ...

你好,不知道你是否用酶标仪测过细胞内的ROS?用酶标仪测细胞ROS的话最后检测的时候是否需要将细胞裂解后在检测?或者是不用裂解直接吹均匀后加到酶标板里测?另外在用探针孵育是是否可以用有血清的培养基稀释探针来孵育呢?
scienceguy
12楼2013-04-03 15:08:43
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果子么么茶

木虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by hellolin at 2013-04-03 15:08:43
你好,不知道你是否用酶标仪测过细胞内的ROS?用酶标仪测细胞ROS的话最后检测的时候是否需要将细胞裂解后在检测?或者是不用裂解直接吹均匀后加到酶标板里测?另外在用探针孵育是是否可以用有血清的培养基稀释探针 ...

第一个问题  没有!
应该不需要裂解 探针都装载到细胞内了  不需要裂解直接可以检测荧光
最后一个问题 看说明书  上面应该有的
13楼2013-04-03 21:12:27
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hellolin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2013-04-03 21:12:27
第一个问题  没有!
应该不需要裂解 探针都装载到细胞内了  不需要裂解直接可以检测荧光
最后一个问题 看说明书  上面应该有的...

好的,谢谢啦
scienceguy
14楼2013-04-04 11:02:04
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zengxin0218

木虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2013-04-03 21:12:27
第一个问题  没有!
应该不需要裂解 探针都装载到细胞内了  不需要裂解直接可以检测荧光
最后一个问题 看说明书  上面应该有的...

你好   不需要裂解怎么测定蛋白啊?   我看到有人说   这个试剂盒测出来最后的单位是:fluoresence intensity unit / mg protein   是不是要破碎细胞啊?   用酶破碎还是超声破碎?
付出总有收获~~
15楼2013-12-06 17:00:24
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by zengxin0218 at 2013-12-06 17:00:24
你好   不需要裂解怎么测定蛋白啊?   我看到有人说   这个试剂盒测出来最后的单位是:fluoresence intensity unit / mg protein   是不是要破碎细胞啊?   用酶破碎还是超声破碎?...

同一批样品,一部分用于测定ROS,另一部分裂解测定蛋白含量
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
16楼2013-12-06 17:06:43
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大灰狼de小屋

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by gigiloveu at 2012-07-06 08:42:41
为什么不用流式?荧光酶标仪误差比较大 而且用的不广泛。
我也是做ROS的·DCF-DA,DHE什么的,我一直是做流式,最近也开始在摸激光共聚焦的条件。

你好,看了你的回复,我最近也要做,有一些疑问。DCFH-DA是在Sigma买的,我的材料要与细胞孵育24h,阳性对照用双氧水处理两个小时,那么我的探针是先加入(在加入材料前加入然后洗去未装载的探针)还是后加入(材料 双氧水处理后再加入探针半小时后洗去)
还有,我一开始先摸索阳性对照的实验条件,发现培养基里只有双氧水也可以使DCFH-DA有荧光,这是怎么回事,DCFH-DA不是要进入细胞后酯解成DCFH才行吗
17楼2015-04-15 21:06:55
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吕波燕

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by gigiloveu at 2012-07-06 08:42:41
为什么不用流式?荧光酶标仪误差比较大 而且用的不广泛。
我也是做ROS的·DCF-DA,DHE什么的,我一直是做流式,最近也开始在摸激光共聚焦的条件。

这位大神前辈可以赐教一下吗?目前我也在做ROS测定,但是很不顺利,心里难受

发自小木虫Android客户端
18楼2018-11-26 10:37:13
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19楼2021-03-03 14:36:16
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20楼2021-10-11 17:27:10
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