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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于ROS(活性氧）测定问题
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sherry325

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
11楼2012-11-19 10:16:58
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hellolin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2012-07-05 15:03:19
介个 你难道不是用试剂盒做的吗 我用的试剂盒激发波是488nm 发射波525左右 实验时波长段内扫描下就知道了 探针就是试剂盒里的东西
有的加入活性氧阳性对照试剂Rosup15-20min就可以检测发射荧光 有的要20-30min 具 ...

你好，不知道你是否用酶标仪测过细胞内的ROS？用酶标仪测细胞ROS的话最后检测的时候是否需要将细胞裂解后在检测？或者是不用裂解直接吹均匀后加到酶标板里测？另外在用探针孵育是是否可以用有血清的培养基稀释探针来孵育呢？
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scienceguy
12楼2013-04-03 15:08:43
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果子么么茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by hellolin at 2013-04-03 15:08:43
你好，不知道你是否用酶标仪测过细胞内的ROS？用酶标仪测细胞ROS的话最后检测的时候是否需要将细胞裂解后在检测？或者是不用裂解直接吹均匀后加到酶标板里测？另外在用探针孵育是是否可以用有血清的培养基稀释探针 ...

第一个问题  没有！
应该不需要裂解 探针都装载到细胞内了  不需要裂解直接可以检测荧光
最后一个问题 看说明书  上面应该有的
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13楼2013-04-03 21:12:27
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hellolin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2013-04-03 21:12:27
第一个问题  没有！
应该不需要裂解 探针都装载到细胞内了  不需要裂解直接可以检测荧光
最后一个问题 看说明书  上面应该有的...

好的，谢谢啦
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scienceguy
14楼2013-04-04 11:02:04
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zengxin0218

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2013-04-03 21:12:27
第一个问题  没有！
应该不需要裂解 探针都装载到细胞内了  不需要裂解直接可以检测荧光
最后一个问题 看说明书  上面应该有的...

你好   不需要裂解怎么测定蛋白啊？   我看到有人说   这个试剂盒测出来最后的单位是：fluoresence intensity unit / mg protein   是不是要破碎细胞啊？   用酶破碎还是超声破碎？
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付出总有收获~~
15楼2013-12-06 17:00:24
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by zengxin0218 at 2013-12-06 17:00:24
你好   不需要裂解怎么测定蛋白啊？   我看到有人说   这个试剂盒测出来最后的单位是：fluoresence intensity unit / mg protein   是不是要破碎细胞啊？   用酶破碎还是超声破碎？...

同一批样品，一部分用于测定ROS，另一部分裂解测定蛋白含量
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
16楼2013-12-06 17:06:43
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大灰狼de小屋

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by gigiloveu at 2012-07-06 08:42:41
为什么不用流式？荧光酶标仪误差比较大 而且用的不广泛。
我也是做ROS的·DCF-DA,DHE什么的，我一直是做流式，最近也开始在摸激光共聚焦的条件。

你好，看了你的回复，我最近也要做，有一些疑问。DCFH-DA是在Sigma买的，我的材料要与细胞孵育24h,阳性对照用双氧水处理两个小时，那么我的探针是先加入（在加入材料前加入然后洗去未装载的探针）还是后加入（材料 双氧水处理后再加入探针半小时后洗去）
还有，我一开始先摸索阳性对照的实验条件，发现培养基里只有双氧水也可以使DCFH-DA有荧光，这是怎么回事，DCFH-DA不是要进入细胞后酯解成DCFH才行吗
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17楼2015-04-15 21:06:55
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吕波燕

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gigiloveu at 2012-07-06 08:42:41
为什么不用流式？荧光酶标仪误差比较大 而且用的不广泛。
我也是做ROS的·DCF-DA,DHE什么的，我一直是做流式，最近也开始在摸激光共聚焦的条件。

这位大神前辈可以赐教一下吗？目前我也在做ROS测定，但是很不顺利，心里难受

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18楼2018-11-26 10:37:13
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www米

禁虫
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19楼2021-03-03 14:36:16
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吐槽小生

禁虫
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20楼2021-10-11 17:27:10
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