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758836596

铜虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 169.7
帖子: 47
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虫号: 1864623
注册: 2012-06-19
性别: MM
专业: 细胞信号转导

[求助] pMAL载体表达重组蛋白

最近在做蛋白表达，载体选择的是pMAL，目的片段是自己设计的一段300多bp的片段，质粒构建成功之后蛋白就是表达不出来，宿主菌试了TB1和BL21，诱导温度试了37,30,16，IPTG也试了各种浓度，结果还是诱导不出来，请问有什么别的办法啊？谢谢各位了。

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1楼 2012-07-02 21:14:35

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edoz1986

新虫 (小有名气)

应助: 20 (小学生)
金币: 300.5
红花: 9
帖子: 206
在线: 64.9小时
虫号: 986360
注册: 2010-03-31
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

1.基因优化，让质粒的发卡结构尽可能少
2.改强启动子试试，或者其他载体。

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15楼2013-05-31 09:19:56

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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

MolEPI: 2
应助: 81 (初中生)
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红花: 1
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虫号: 1512351
注册: 2011-11-27
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 虫虫最近很活跃哦，谢谢对分子版的支持 2012-07-03 15:36:20
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 19:02:17

表达不出来的原因很多的，宿主菌跟诱导条件是一方面，另一方面要考虑你扩增的目的片段是否完整？有无表达先例，这个可以参照一些文献，还有你目标片段的稀有密码子是否检测过，如果连续出现稀有密码子，可能会造成翻译中断，这也会造成蛋白表达的失败，如果是这个情况就需要更换专门表达稀有密码子过多的宿主细胞.
建议楼主多从表达载体和目的片段的结构入手，祝楼主好运.