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758836596

铜虫 (初入文坛)

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[求助] pMAL载体表达重组蛋白

最近在做蛋白表达，载体选择的是pMAL，目的片段是自己设计的一段300多bp的片段，质粒构建成功之后蛋白就是表达不出来，宿主菌试了TB1和BL21，诱导温度试了37,30,16，IPTG也试了各种浓度，结果还是诱导不出来，请问有什么别的办法啊？谢谢各位了。

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1楼 2012-07-02 21:14:35

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铜虫 (初入文坛)

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引用回帖:

11楼: Originally posted by dy_414 at 2012-07-05 10:21:51
罗塞塔，先试试这个吧，我们实验室也有pMAL不行的，换了罗塞塔就好了

我也打算换这个菌试试，但是没有这个菌种，请问您那有吗？能不能给我一点？先谢谢啦！

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12楼2012-07-05 10:40:37

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Marado

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+3, 虫虫最近很活跃哦，谢谢对分子版的支持 2012-07-03 15:36:20
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 19:02:17

表达不出来的原因很多的，宿主菌跟诱导条件是一方面，另一方面要考虑你扩增的目的片段是否完整？有无表达先例，这个可以参照一些文献，还有你目标片段的稀有密码子是否检测过，如果连续出现稀有密码子，可能会造成翻译中断，这也会造成蛋白表达的失败，如果是这个情况就需要更换专门表达稀有密码子过多的宿主细胞.
建议楼主多从表达载体和目的片段的结构入手，祝楼主好运.