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解瑶123

银虫 (正式写手)

[求助] 关于磁珠

有木有人做磁珠，也叫磁性微球，其中有个链亲和素包被的磁珠，与生物素偶联后，能不能拆开重新使用这个磁珠。跪求啊，愁死我了
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1楼 2012-06-28 17:04:20
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xiaotuzi773

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般不可以再用。链霉亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，分子量为68kDa，由4个亚单位组成，对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。
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2楼2012-06-28 17:19:18
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xiaotuzi773

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-28 20:07:46
解瑶123: 回帖置顶 2012-06-29 08:33:00
解瑶123: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 太好了谢谢 2012-06-29 08:33:48
生物素和链霉亲和素之间化学键的断裂需要严格条件。例如，将复合物置入PH=8.2、含95％甲酰氨的10 mM EDTA中 65°C孵育5分钟或90°C孵育2分钟，超过96%生物素化DNA片段均可被特异地分离。另一种方法，可将与磁珠相连的固化靶分子置于0.1%SDS中煮沸5分钟。个人感觉如果用上述办法破坏他们之间的化学键，可能磁珠上的亲和素亚基也被破坏掉了，如果还用来捕获生物素的话应该就不能再用了。
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3楼2012-06-28 17:23:29
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wjjia

金虫 (小有名气)
解瑶123: 回帖置顶 2012-06-29 08:33:58
请问大家做过往磁珠上连接链霉亲和素吗？怎么样连接效率会高？
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4楼2012-06-28 17:51:41
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sk_yb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-06-28 20:07:52
一般不能再用，说明书上都会强调的。重复使用效果就很差了。
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5楼2012-06-28 20:06:44
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解瑶123

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wjjia at 2012-06-28 17:51:41
请问大家做过往磁珠上连接链霉亲和素吗？怎么样连接效率会高？

这个问题我也想问，那个xiaotuzi大侠解救一下
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6楼2012-06-29 08:34:57
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weidandande

银虫 (小有名气)
我用的是磁珠试剂盒，感觉挺好用，就是有些贵。
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7楼2012-07-01 16:07:04
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解瑶123

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by weidandande at 2012-07-01 16:07:04
我用的是磁珠试剂盒，感觉挺好用，就是有些贵。

买不起太贵的
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8楼2012-07-02 15:41:25
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牵手青春

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaotuzi773 at 2012-06-28 17:19:18
一般不可以再用。链霉亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，分子量为68kDa，由4个亚单位组成，对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。

跪求问一下师兄/师姐，你们用磁珠的时候会不会去验证磁珠上结合的核酸量？还有就是说生物素亲和素的结合常数高，那你们有没有量化过磁珠的结合效率吗，比如50%、70%的？？现在我在做磁珠，最后没有信号，所以就一直找不到问题所在，当做感觉有些不好验证
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9楼2017-12-15 11:19:00
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