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M110899

金虫 (正式写手)

[求助] 抗体制备!迷茫。。跪求指点!

前段时间将兔IL-10基因克隆到PET-32a载体上,现在载体构建已经完毕。因为抗兔IL-10的商品化抗体几乎是没有,所以现在想自己制备抗体,但实验室没有人做过,希望各位能给我一些指点。
1、我查文献,有人跟我做的是相似的,他用的是His5单克隆抗体为一抗,鼠抗兔HRP为二抗进行WB分析。请问,我可以参照这篇文献,用这两种抗体做WB吗?
2、蛋白纯化具体要怎么做?
3、由于兔和鼠都是啮齿类的,亲缘关系相对较近,如果我在小鼠体内制备抗体,会不会降低了抗体的效价?
PS:我说的那篇文献是:《中国白兔白介素-10基因的克隆、表达及其抗体的制备》
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