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M110899

金虫 (正式写手)

[求助] 抗体制备！迷茫。。跪求指点！

前段时间将兔IL-10基因克隆到PET-32a载体上，现在载体构建已经完毕。因为抗兔IL-10的商品化抗体几乎是没有，所以现在想自己制备抗体，但实验室没有人做过，希望各位能给我一些指点。
1、我查文献，有人跟我做的是相似的，他用的是His5单克隆抗体为一抗，鼠抗兔HRP为二抗进行WB分析。请问，我可以参照这篇文献，用这两种抗体做WB吗？
2、蛋白纯化具体要怎么做？
3、由于兔和鼠都是啮齿类的，亲缘关系相对较近，如果我在小鼠体内制备抗体，会不会降低了抗体的效价？
PS：我说的那篇文献是：《中国白兔白介素-10基因的克隆、表达及其抗体的制备》
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1楼 2012-06-23 20:18:40
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