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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白胶脱色
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lqs075

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白胶脱色

最近跑蛋白，脱色总会出现下面这种情况，背景色好重，而且也换了好几次脱色液，也脱了至少两天了～～以前不会的。各位高手帮忙看看这是什么原因～～～急！非常感谢！
我不懂怎么上传图片，所以就以附件的形式上传了～～[ Last edited by lqs075 on 2012-6-22 at 20:30 ]
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    • 2012-06-22 20:30:06, 2.39 M

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1楼 2012-06-22 20:24:14
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

饼哥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lqs075: 金币+5, ★有帮助 2012-06-25 01:29:53
一，使用新的电泳缓冲液。二，你的上样液中有不溶性物质，建议上样前12000rpm离心1min。三，你染色时间太长了，建议缩短染色时间，过夜脱色。
赞一下(2人) 回复此楼
爱科研，更爱小木虫！
7楼2012-06-23 16:47:01
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普通回帖

eagle311

铁杆木虫 (正式写手)

bioenergy

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lqs075: 金币+2, ★有帮助 2012-06-25 01:30:07
lqs075: 金币+3, ★有帮助 2012-06-25 01:31:41
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-25 13:45:52
你这个是上样的问题，上样之前最后离心5min。可以避免不溶性的颗粒影响。上样量是多少，我看你有溢出。脱色的话，你可以用固定液（50%甲醇，5%乙酸）先脱色一次，这样效果好一点。此外，跑电泳电流不要太大，如果能在较低温度跑电泳带可能会好一些。你的带有些凌乱。
赞一下 回复此楼
致力于工业微生物，尤其是生物制药方向
2楼2012-06-23 09:04:58
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hsuley

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能上样buffer污染了，重配上样buffer试试
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3楼2012-06-23 10:09:40
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毛桃就是我

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
染色时间长  脱色时间短   建议过夜脱色
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木有签名呀！
4楼2012-06-23 12:01:49
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lqs075: 金币+1, ★有帮助 2012-06-25 01:30:31
在上柱子之前还是需要离心一下了。
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蓝精灵
5楼2012-06-23 12:54:58
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maothree54

至尊木虫 (知名作家)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lqs075: 金币+2, ★有帮助 2012-06-25 01:30:45
二楼正解！主要是电泳条件的设置问题，脱色基本上不需要什么技术含量的，一般40%甲醇、10%冰醋酸和50%水就可以了
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多动大脑，严谨的搞科研！
6楼2012-06-23 14:32:47
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lqs075

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 毛桃就是我 at 2012-06-23 12:01:49
染色时间长  脱色时间短   建议过夜脱色

不只是过夜脱色了，我都脱了超过两天了
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8楼2012-06-23 19:03:33
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lqs075

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 饼哥 at 2012-06-23 16:47:01
一，使用新的电泳缓冲液。二，你的上样液中有不溶性物质，建议上样前12000rpm离心1min。三，你染色时间太长了，建议缩短染色时间，过夜脱色。

我只染了2个半小时，会太长了吗？一般染多久呢？而且我脱色时间也很长，都超过两天了
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9楼2012-06-23 19:05:40
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lqs075

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by eagle311 at 2012-06-23 09:04:58
你这个是上样的问题，上样之前最后离心5min。可以避免不溶性的颗粒影响。上样量是多少，我看你有溢出。脱色的话，你可以用固定液（50%甲醇，5%乙酸）先脱色一次，这样效果好一点。此外，跑电泳电流不要太大，如果能 ...

跑胶的时候浓缩胶用的电压是80V，分离胶用的是120V，这会大了吗？该用多大的呢？
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10楼2012-06-23 19:09:05
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