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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取~
汕头大学海洋科学接受调剂
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西交-flx

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取~

请教各位大侠：
     本人提取质粒，载体是pEGFP-N1，用质粒小提试剂盒分别提取了两次菌液，跑胶显示什么都没提取出来，后改用质粒小提中量试剂盒，跑电泳提取出来了，想问问是什么原因？这两种试剂盒有什么不同，是纯化柱的原因吗？若能帮助小女不胜感激~~~
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1楼 2012-06-21 15:48:03
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keydy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励热心的虫虫 2012-06-22 13:37:41
西交-flx: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-06-25 08:46:13
“小提试剂盒”和“小提中量试剂盒”的差别在于一次抽提量的多少。
我想你应该使用的是离心柱型的kit,而抽提的pEGFP-N1本身拷贝数不算低，因此，如果平行试验的话，应该都能抽提出质粒。
由于你提供的信息太少，我分析你可能在使用小提试剂盒的时候哪个环节没有处理好，甚至是培养菌液的时候就有问题。
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2楼2012-06-22 10:32:58
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jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该不是纯化柱的问题，可能是你其他操作问题，有可能是你做质粒小提时，菌液太多裂解不完全造成的
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3楼2012-06-22 10:58:29
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该不是柱子的问题吧，这两种试剂盒只是对于提取质粒的量不同罢了，是不是哪个步骤搞错了哦！
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4楼2012-06-22 11:14:27
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flownaway

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试剂盒应该是不会出问题的，可能是操作失误吧...
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5楼2012-06-22 15:16:55
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西交-flx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by keydy at 2012-06-22 10:32:58
“小提试剂盒”和“小提中量试剂盒”的差别在于一次抽提量的多少。
我想你应该使用的是离心柱型的kit,而抽提的pEGFP-N1本身拷贝数不算低，因此，如果平行试验的话，应该都能抽提出质粒。
由于你提供的信息太少，我 ...

的确，菌液量不同，前两次用小提试剂盒时菌液量比较少，比较难于抽提。。。
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6楼2012-06-25 08:47:54
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西交-flx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jimjohntall at 2012-06-22 10:58:29
应该不是纯化柱的问题，可能是你其他操作问题，有可能是你做质粒小提时，菌液太多裂解不完全造成的

前两次菌液量太少，很难抽提出质粒。。。
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7楼2012-06-25 08:48:52
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西交-flx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 504775490 at 2012-06-22 11:14:27
应该不是柱子的问题吧，这两种试剂盒只是对于提取质粒的量不同罢了，是不是哪个步骤搞错了哦！

是的，现在搞明白了，是菌液量太少造成的，谢谢您的回复！
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8楼2012-06-25 08:49:35
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西交-flx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by flownaway at 2012-06-22 15:16:55
试剂盒应该是不会出问题的，可能是操作失误吧...

前两次菌液量太少造成的~试剂盒没问题的。。。 谢谢回复！
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9楼2012-06-25 08:50:42
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西交-flx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by keydy at 2012-06-22 10:32:58
“小提试剂盒”和“小提中量试剂盒”的差别在于一次抽提量的多少。
我想你应该使用的是离心柱型的kit,而抽提的pEGFP-N1本身拷贝数不算低，因此，如果平行试验的话，应该都能抽提出质粒。
由于你提供的信息太少，我 ...

还有一点，当时用小提试剂盒时菌液量比较少，质粒提取后跑胶什么条带都没有；后来菌液量培养大时用小提中量试剂盒提取出来了所谓质粒，但是跑胶显示条带很浅，而且质粒理论上应该跑出三个条带，但是我这个跑出了五六个条带，条带间距离挨得很近，后来把菌液送去测序结果说是没有抽提出质粒，也就是之前我提取的就不是质粒，搞不清楚是什么。。。现在还不知道原因是什么？能否帮我分析分析。。。
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10楼2012-06-25 09:01:01
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