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[求助]
着急！RT-PCR扩增效率低，情况很诡异，求助高手帮忙指点
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本人最近在做白色脂肪组织的基因表达，遇到一个很难解决的问题，不知如何解决，也不知问题出在哪里，希望高手帮忙指点！ 提取的RNA反转后测定了β-actin和GAPDH，表达量和线性都良好，可是在开始测定18s、PPARγ等其它基因是就出现了扩增效率只能达到50-60%的情况，于是重新做了混标，稀释了标准品，测定后发现扩增效率上去了，接近100%。可是，就是这个已经验证没有问题的标准品，今天再重新做基因表达的时候，扩增效率又只有50-60%了，不知道问题出在哪里？PS：引物，SYBR，程序都没有变换过，应该不是这些因素的问题。个人怀疑是引入了干扰物质，是不是有这种可能，有没有高人也遇到过这种问题？可能的干扰物质有哪一些呢？ |
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12楼2012-06-21 09:30:38
孙启亮
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- 专业: 前寒武纪地质学
3楼2012-06-18 21:41:18
4楼2012-06-18 21:48:09
5楼2012-06-18 21:48:28