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Amy_13

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR怎么扩都扩不出来,试了好几种酶都不行 已有1人参与

求助!!!
最近PCR怎么扩都扩不出来,试了好几种酶都不行,温度梯度都做了,也不行,引物有个半年的时间,但是一直保存在-20°C,没有反复冻融,并且有的样能扩出来而有的就扩不出来,那要是引物有问题的话应该都扩不出来才对啊,检测cDNA内参都能扩出来。同样的水和酶别人都能扩出来,实在不知道问题在哪里了!麻烦哪位大侠给个意见!谢谢!!!

[ Last edited by Pd7577 on 2012-6-15 at 08:55 ]
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许愿崔

金虫 (小有名气)

首先你应该确定模板DNA没有问题,然后再确定个药品,如果都没问题的话,你可以反复扩几次已扩出来的样品,看看是否能再出来,如果能出来,就有可能DNA中就没有那条带
3楼2012-06-12 18:07:57
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tyssave

金虫 (小有名气)

我也有过这样的时候,有过两次,一次是因为水的原因,后来我直接接18.2的去离子水(没灭菌)做就好了;第二次也是不知道什么原因扩不出来,检测了模板DNA也没问题,后来就拿少量个体不停的试,还是会出来的。唉,实验就这么回事,要是一段时间比较顺利的话就抓紧时间赶快做,要是一段时间都做不出来那就扔到一边去干别的事,等过一个星期两个星期再去做
Stuart
2楼2012-06-11 12:28:12
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dkstorm

铁虫 (初入文坛)

我都用试剂盒提基因组了还扩不出来,天啊
4楼2012-06-18 22:17:53
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