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Amy_13

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR怎么扩都扩不出来，试了好几种酶都不行 已有1人参与

求助！！！
最近PCR怎么扩都扩不出来，试了好几种酶都不行，温度梯度都做了，也不行，引物有个半年的时间，但是一直保存在-20°C，没有反复冻融，并且有的样能扩出来而有的就扩不出来，那要是引物有问题的话应该都扩不出来才对啊，检测cDNA内参都能扩出来。同样的水和酶别人都能扩出来，实在不知道问题在哪里了！麻烦哪位大侠给个意见！谢谢！！！

[ Last edited by Pd7577 on 2012-6-15 at 08:55 ]
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1楼 2012-06-11 10:53:55
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许愿崔

金虫 (小有名气)
首先你应该确定模板DNA没有问题，然后再确定个药品，如果都没问题的话，你可以反复扩几次已扩出来的样品，看看是否能再出来，如果能出来，就有可能DNA中就没有那条带
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3楼2012-06-12 18:07:57
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tyssave

金虫 (小有名气)
我也有过这样的时候，有过两次，一次是因为水的原因，后来我直接接18.2的去离子水（没灭菌）做就好了；第二次也是不知道什么原因扩不出来，检测了模板DNA也没问题，后来就拿少量个体不停的试，还是会出来的。唉，实验就这么回事，要是一段时间比较顺利的话就抓紧时间赶快做，要是一段时间都做不出来那就扔到一边去干别的事，等过一个星期两个星期再去做
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Stuart
2楼2012-06-11 12:28:12
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dkstorm

铁虫 (初入文坛)
我都用试剂盒提基因组了还扩不出来，天啊
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4楼2012-06-18 22:17:53
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