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谢婷1988

新虫 (初入文坛)

[求助] 求解惑

实验室毕业的一个师兄筛了一个水解酶的突变株,突变位点在催化中心之外,催化效率提高了4倍还发了文章,但是我现在用他的突变质粒转化来表达这个突变酶却没有活力了,很奇怪,质粒是pET22b(+),宿主菌是BL21(DE3),转化后挑了10个菌落,37℃培养到OD值0.68,加入终浓度为0.2mM的IPTG,25℃诱导表达5h测活力,同时用没有突变的原始酶做了对照,原始酶有酶活,突变酶就是没有
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木虫 (著名写手)

要原始数据来看,或者问一下跟他一起做实验的,看看实际是怎么测的,是怎么回事.有时候一些离子会影响酶活很多.
为什么
4楼2012-06-07 10:20:29
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
再重新测一下序吧,时间长了的话,是有可能突变的。你保种加入的甘油等物质,也有促进突变的作用
2楼2012-06-07 09:11:45
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谢婷1988

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-06-07 09:11:45
再重新测一下序吧,时间长了的话,是有可能突变的。你保种加入的甘油等物质,也有促进突变的作用

可是我是用的质粒新转化的菌株做的,质粒送测序也没有问题
3楼2012-06-07 09:47:48
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