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冰糖芦荟

金虫 (正式写手)

[求助] dna切胶回收中各试剂的作用

dna切胶回收中各试有时要加异丙醇,他的作用是什么啊?
今天加完之后出现了絮状沉淀是怎么回事?
还有为什么每次本来酶切以后跑胶都有很清楚的条带,切胶回收后基本上没有目的条带了,有时侯有一点但很微弱,一但做连接还是失败。
请教各位帮我解决一下吧!!
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371522029

金虫 (正式写手)

小鱼儿

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-05 14:05:06
切胶回收切胶的步骤还是很关键的,一般晚上操作,在360NM照射,千万不能放到成像的一起里面,在成像仪里面的紫外波长比较短,很容易破坏基因片段。切胶的时候选取条带比较亮的,所切得范围尽量窄。如果所得到的条带比较宽,smil现象比较少的情况,说明所提取的基因大小比较一致,这时候可以选择加大琼脂糖的浓度使得条带比较窄。被切得胶带窄,所含的杂质就比较少,回收的收率就比较大。
11楼2012-06-05 02:12:40
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-04 18:55:52
异丙醇是为了增强DNA和柱子的吸附,增加DNA回收率,回收柱可以重复洗2次,洗脱液加热也可以增加回收率。
2楼2012-05-31 21:10:39
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
回收柱多洗几次看看吧。
蓝精灵
3楼2012-05-31 21:19:34
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冰糖芦荟

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by caoluoyuan at 2012-05-31 21:10:39
异丙醇是为了增强DNA和柱子的吸附,增加DNA回收率,回收柱可以重复洗2次,洗脱液加热也可以增加回收率。

这些我都做了呀,可是每次回收完跑电泳结果特别暗,有时候会完全消失,到底是怎么一回事儿呢
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4楼2012-05-31 21:23:42
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