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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 希望高人指点迷津，关于蛋白质葡聚糖凝胶过柱问题
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)
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11楼2012-05-29 16:58:55
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durian0314

金虫 (小有名气)
凝胶不都是在有机溶剂里面保存的么 烘干磨成粉...是不是不太对
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12楼2012-05-29 17:02:58
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一步一步

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jixiao_02 at 2012-05-29 16:09:09
真的是非常感谢，但是我并没有蠕动泵，全靠重力的作用平衡柱子，怎样的柱子才算是压均匀了，这个不太懂唉，能不能再给说详细点。不好意思，我刚接触这个实验，好多不太明白。还有就是我上样的蛋白质的浓度是20mg/m ...

G-25柱是一个组群分离的柱子，目的是将蛋白质和小分子物质进行分离，主要被推荐用于含有球蛋白的组群分离。该柱料用于以分子量大于5000的分子中除盐和其他小分子污染物。
你的蛋白浓度在20mg/ml应该可以了。一般为了增加柱料的分辨能力，样品要浓缩。但是要避免浓度高于70mg/ml，因为粘度效应会干扰分离。
对于上样体积，要根据你柱子的柱体积而来。对于脱盐柱而言，最高上样量可达30%。
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13楼2012-05-30 08:44:01
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jixiao_02 at 2012-05-29 16:19:10
用的是热水溶胀的，2小时...

既然是用热水溶胀的，就不需要脱气了
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14楼2012-05-30 15:27:39
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jixiao_02

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 一步一步 at 2012-05-30 08:44:01
G-25柱是一个组群分离的柱子，目的是将蛋白质和小分子物质进行分离，主要被推荐用于含有球蛋白的组群分离。该柱料用于以分子量大于5000的分子中除盐和其他小分子污染物。
你的蛋白浓度在20mg/ml应该可以了。一般为 ...

我过柱子除的是分子量390的分子，应该是可以完全分来的，蛋白质应该在前边基本上全部洗脱下来吧，但是不知道为什么，蛋白质在每一管里都有，而后边小分子和蛋白质混合下来。有人建议我买一个蠕动泵，说用重力很难将柱子压实，柱效不好。可是我查了一下蠕动泵的价格挺高的，有没有方法不用泵就可以将柱子装的很好，柱效高，将蛋白质和小分子较完全的分开啊？
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15楼2012-05-31 09:31:43
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一步一步

木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by jixiao_02 at 2012-05-31 09:31:43
我过柱子除的是分子量390的分子，应该是可以完全分来的，蛋白质应该在前边基本上全部洗脱下来吧，但是不知道为什么，蛋白质在每一管里都有，而后边小分子和蛋白质混合下来。有人建议我买一个蠕动泵，说用重力很难将 ...

如果每一个管中都有蛋白的话，那就是柱子柱效不好，装柱没装好啊。你可以尝试先看看装柱注意事项，并重新装柱。另外，建议你直接买GE lifesciences的PD-10柱，柱效绝对好，他们都是机器装柱，很好用的，至于价钱我不是很清楚，目前实验室用的还是之前别人买的。
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16楼2012-05-31 10:16:58
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一步一步

木虫 (著名写手)
我有一份关于关于柱效测定和装柱方法的资料，可以给楼主看看，忽然发现不知道怎么上传资料稍等。。。
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17楼2012-05-31 10:23:07
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jixiao_02

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 一步一步 at 2012-05-31 10:23:07
我有一份关于关于柱效测定和装柱方法的资料，可以给楼主看看，忽然发现不知道怎么上传资料稍等。。。

谢谢，希望能够尽快看到您的资料，我现在非常需要啊
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18楼2012-05-31 11:00:48
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一步一步

木虫 (著名写手)
这里面最后一页有提到重力装柱，你看看。。。自己按照现有条件改进一下。。。希望对LZ有用。。。。
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19楼2012-05-31 12:37:06
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jixiao_02

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 一步一步 at 2012-05-31 12:37:06
这里面最后一页有提到重力装柱，你看看。。。自己按照现有条件改进一下。。。希望对LZ有用。。。。

非常感谢
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20楼2012-05-31 13:35:51
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