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wshi85

木虫 (正式写手)

[求助] 一个简单实验的设计

懦懦的问下:我想做一个酶的基因的测序,是不是可以先提取总的RNA,之后是否可以直接就将总的rna进行cDNA合成(需不需要进行mRNA进行提取?),在设计引物扩增mRNA的基因?本人还未涉足这些实验,但是马上要做了,所以请教大家
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wshi85

木虫 (正式写手)

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4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-23 00:44:52:
嗯...........................
       不明白楼上各位的通用引物指的是什么................
       具体流程应该如下:
       1. 提取样品Total RNA
       2. 逆转录反应 肯定使用OligodT做引物 这样保证反

嗯,那我想问下逆转录反应我打算买上海生工的试剂盒做,那是不是不需要在买“Reverse Transcriptase 诸如SuperScript系列 同时辅以OligodT+Random Hexamer”,猜测mRNA大概在2000bp左右
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5楼2012-05-23 16:42:10
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wshi85

木虫 (正式写手)

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2楼: Originally posted by crazymouse66 at 2012-05-22 19:22:49:
先提取总RNA,然后利用通用引物反转录成cDNA,然后设计引物,进行PCR后电泳,观察在相应的mark处是否有条带出现,有的话切胶回收DNA,然后与载体进行连接,然后导入感受态细胞,一晚后挑菌落进行培养,再做菌液PCR看

我打算买试剂盒做cDNA,这个通用的引物就是指试剂盒附带的引物吗?还有做PCR时的mark是什么?需要自己在买的吗(pcr也打算买试剂盒)
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6楼2012-05-23 16:45:05
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