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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

[交流] RNA电泳 已有3人参与

大家好，我是个提取RNA的新手，不知道提取之后的电泳要用什么做MARKER，RNA的分子量大概是多少呢？如果要继续做荧光定量pcr的话，还要做哪些工作呢？不胜感激。。。
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1楼 2012-05-18 16:11:26
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vickie20

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你要是做荧光定量的话，跑电泳不需要marker的吧……跑出来的带完整性好就行，然后做个反转录，接着就可以做定量了
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2楼2012-05-18 16:51:10
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wansanlian

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-18 19:54:53
你要用哪个胶跑?变性还是非变性的?变性的就用RNAmaker非变性就用DNAmaker就行啊,我们都用这个的呢,不过也就起个指示的作用,还是测下OD值会比较好点~
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乱花渐欲迷人眼
3楼2012-05-18 19:14:35
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励 2012-05-20 18:32:35
跑个快速电泳，通过观察28S,18S,5S条带的亮度，检测一下RNA提取的质量及分解情况。如果需要做实时定量PCR的话，首先要定量，测OD值，理论上OD值在1.8-2.0为优。通过定量根据浓度行进逆转录，合成cDNA，然后做realtime-PCR
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也许似乎大概是，然而未必不见得。
4楼2012-05-18 20:33:57
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by vickie20 at 2012-05-18 16:51:10:
你要是做荧光定量的话，跑电泳不需要marker的吧……跑出来的带完整性好就行，然后做个反转录，接着就可以做定量了

谢谢！
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5楼2012-05-19 19:45:37
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wansanlian at 2012-05-18 19:14:35:
你要用哪个胶跑?变性还是非变性的?变性的就用RNAmaker非变性就用DNAmaker就行啊,我们都用这个的呢,不过也就起个指示的作用,还是测下OD值会比较好点~

非变性的，就是琼脂糖凝胶。前些天实验室的比色皿被打碎了。。。。。
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6楼2012-05-19 19:46:50
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-05-18 20:33:57:
跑个快速电泳，通过观察28S,18S,5S条带的亮度，检测一下RNA提取的质量及分解情况。如果需要做实时定量PCR的话，首先要定量，测OD值，理论上OD值在1.8-2.0为优。通过定量根据浓度行进逆转录，合成cDNA，然后做real ...

这个可不可以就根据电泳的条带亮度呢？
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7楼2012-05-19 19:58:50
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-20 18:32:49
引用回帖:
7楼: Originally posted by piaoyunokok at 2012-05-19 19:58:50:
这个可不可以就根据电泳的条带亮度呢？

是根据亮度来确定的，理论上来说28S条带的亮度应该是18S的两倍，5S条带的亮度意味着分解情况
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也许似乎大概是，然而未必不见得。
8楼2012-05-20 09:42:44
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-05-20 09:42:44:
是根据亮度来确定的，理论上来说28S条带的亮度应该是18S的两倍，5S条带的亮度意味着分解情况

谢谢！
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9楼2012-05-20 18:33:03
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