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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Hind111 与 Not1双酶切请教 急急急！！！
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skuy1223

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人感觉也可能是酶本身的问题，可能有一种酶失活。建议楼主换新的酶试一下。
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努力！
11楼2012-05-20 14:05:00
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xuanfeng4567

银虫 (初入文坛)
请问你最后是什么解决这个问题的，谢谢。我也遇到这个问题了。
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迷失那些岁月
12楼2013-10-09 14:18:12
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子墨青竹

铜虫 (初入文坛)
我最近也做双酶切，用的是TAKARA 的Not1和Sal1酶，同样一起切也没切开，也是单酶切效果，后面用俩个酶各自的酶切buffer切，Not1没切开，Sal1切开了。
Not1体系，我加了30倍过量酶切，跑胶结果和质粒图谱一样，Not1buffer:H*BSA*Triton X-100，完全Takara的按照说明来...切了好几次，从一小时到八小时，都一样切不开
我现在怀疑：1、我提的质粒不够纯，我按照生工小量质粒提取试剂盒提的，
                  2、酶活性被抑制，或者失效了
目前没得到解决，我也好烦这个，实验推不动...
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13楼2014-07-30 17:37:40
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子墨青竹

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by skuy1223 at 2012-05-20 14:05:00
个人感觉也可能是酶本身的问题，可能有一种酶失活。建议楼主换新的酶试一下。

老板一般不会轻易认同酶失效....
除非确切的证明酶已经失效了，
请问您知道怎样做对照说明么....
我已经做了 质粒 俩种酶的单酶切  双酶切（一个先加另一个后加）
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14楼2014-07-30 17:41:40
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