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skuy1223

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人感觉也可能是酶本身的问题,可能有一种酶失活。建议楼主换新的酶试一下。
努力!
11楼2012-05-20 14:05:00
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xuanfeng4567

银虫 (初入文坛)

请问你最后是什么解决这个问题的,谢谢。我也遇到这个问题了。
迷失那些岁月
12楼2013-10-09 14:18:12
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子墨青竹

铜虫 (初入文坛)

我最近也做双酶切,用的是TAKARA 的Not1和Sal1酶,同样一起切也没切开,也是单酶切效果,后面用俩个酶各自的酶切buffer切,Not1没切开,Sal1切开了。
Not1体系,我加了30倍过量酶切,跑胶结果和质粒图谱一样,Not1buffer:H*BSA*Triton X-100,完全Takara的按照说明来...切了好几次,从一小时到八小时,都一样切不开
我现在怀疑:1、我提的质粒不够纯,我按照生工小量质粒提取试剂盒提的,
                  2、酶活性被抑制,或者失效了
目前没得到解决,我也好烦这个,实验推不动...
13楼2014-07-30 17:37:40
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子墨青竹

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by skuy1223 at 2012-05-20 14:05:00
个人感觉也可能是酶本身的问题,可能有一种酶失活。建议楼主换新的酶试一下。

老板一般不会轻易认同酶失效....
除非确切的证明酶已经失效了,
请问您知道怎样做对照说明么....
我已经做了 质粒 俩种酶的单酶切  双酶切(一个先加另一个后加)
14楼2014-07-30 17:41:40
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