固相多肽合成中的cleavage和沉淀多肽问题 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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gucashyh

禁虫 (正式写手)

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感谢参与，应助指数 +1
lvziyu: 金币+12, ★★★很有帮助 2012-05-11 18:12:29

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11楼2012-05-11 15:55:50

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gucashyh

禁虫 (正式写手)

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12楼2012-05-11 15:57:47

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lvziyu

铁虫 (正式写手)

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10楼: Originally posted by peopole at 2012-05-11 15:34:53:
有的说是原体积的十分之一，但是我觉得还不够，尽量悬到没有TFA出来为止，这样沉淀出来的蛋白才是白色的，而且TFA含量高了也是不好纯化的。

灰常感谢

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13楼2012-05-11 18:09:09

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lvziyu

铁虫 (正式写手)

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11楼: Originally posted by gucashyh at 2012-05-11 15:55:50:
肽链上没有与酸反应的基团，可以直接尝试用TFA进行切割，切割完毕之后，将TFA旋转蒸发至1ML以内，再加入乙醚。乙醚可以事先用冰冷却一下。加入乙醚再旋转蒸发，一般得不到固体。

加入乙醚之后不是要离心么怎么变旋转蒸发了？恩 NOVA的那个手册有么求下载 lvziyu1987@126.com 灰常感谢！

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14楼2012-05-11 18:12:25

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Tany828

新虫 (初入文坛)

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切割离心后的粗肽状态跟肽序列本身有关的，MS和HPLC鉴定一下就能判断个大概什么情况，您的序列中疏水性氨基酸多吗？

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浙江鸿拓生物技术有限公司多肽、核酸，分子生物学咨询联系电话：18968075982 QQ:1979882769

15楼2012-05-11 20:30:50

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lvziyu

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2楼: Originally posted by qiaoshu177 at 2012-05-11 08:58:08:
我感觉是你的切割溶剂出了问题，常用的切割溶剂有两种：Reagent B（TFA/苯酚/水/Tis=88.5：5：5：2.5）和Reagent K（TFA/苯酚/苯甲硫醚/水/EDT=82.5：5：5：5：2.5）。估计你想用的是Reagent K，那还是需要按比例 ...

请问一下reagent B中的苯酚起什么作用的？ reagent能脱除Trt么？！谢谢！

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16楼2012-05-12 08:32:15

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