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固相多肽合成中的cleavage和沉淀多肽问题
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固相多肽合成中交联树脂的步骤已经搞定了 只是wang树脂的切割和沉淀不知道怎么搞 我做的肽链有13个长度 fmoc保护已经脱掉了 侧链上的保护基有tBu和Trt 树脂的切割溶剂没有统一的标准 恩 我自己用的是TFA 水 苯酚 茴香硫醚 EDT（1,2-乙二硫醇）配置的 可EDT的味道特别的大 扛不住 切割树脂后的滤液加到乙醚中也没有明显的沉淀 只是有乳浊状的 抽滤之后没有拿到沉淀 之后离心拿到的产物是黄色油状的 感觉有问题 恩 求做过多肽固相合成的大侠指导 不胜感激！！！ |
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13楼2012-05-11 18:09:09
qiaoshu177
铁杆木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lvziyu: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-11 09:46:45
lvziyu: 回帖置顶 2012-05-25 09:48:41
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lvziyu: 回帖置顶 2012-05-25 09:48:41
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我感觉是你的切割溶剂出了问题，常用的切割溶剂有两种：Reagent B（TFA/苯酚/水/Tis=88.5：5：5：2.5）和Reagent K（TFA/苯酚/苯甲硫醚/水/EDT=82.5：5：5：5：2.5）。估计你想用的是Reagent K，那还是需要按比例配制的，切割的反应时间为2~2.5h，之后的滤液加到10倍体积以上的冰乙醚中，振摇均匀，冰浴中静止约30min，离心收集沉淀（注意：不能过滤，否则会因多肽的粘附而损失很多产物）。 因为使用Reagent K，侧链上的tBu和Trt 都应该被脱除，得到的应该是没有保护的多肽。还有切割溶剂的量大约为1g树脂用1mL切割试剂就足够，用多了反而会造成不易获得沉淀。 |
2楼2012-05-11 08:58:08
3楼2012-05-11 09:52:56
4楼2012-05-11 10:01:06