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syn1985

木虫 (正式写手)

[求助] 用过PKC1139做敲除的虫子来看看

我第一次用这个质粒做敲除，因为是温敏型的 所以就30摄氏度培养 但是转化到ET12567里面后30摄氏度平板要养快20个小时才有菌落 挑单克隆验证时摇了24小时看菌浓度还是很低 不知道大家在做这个的时候都是摇多久才达到做结合转移的数量的啊？
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1楼 2012-05-09 16:53:09
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156348820

木虫 (小有名气)
楼主  你的问题解决了吗？？   我也在用pKC1139和ET12567来做链霉菌基因敲除。我就不知道pKC1139转到JM109中37度培养  也能提到质粒。
我已经构建好了pKC1139的载体了，而且转化到ET12567了，到现在我都不知道该不该使用37度来培养这个菌？  下一步要做结合转移了，不能再糊涂下去了   求解啊？

你做完了吗？后来怎么搞的？？
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2楼2014-03-27 20:11:32
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syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 156348820 at 2014-03-27 20:11:32
楼主  你的问题解决了吗？？   我也在用pKC1139和ET12567来做链霉菌基因敲除。我就不知道pKC1139转到JM109中37度培养  也能提到质粒。
我已经构建好了pKC1139的载体了，而且转化到ET12567了，到现在我都不知道该不 ...

还是重新构建吧 37摄氏度下有pkc1139能存活 这些应该都是突变了的 如果你不重新做做完突变后质粒没办法消除怎么办
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3楼2014-03-29 08:58:58
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xiaohong10

新虫 (正式写手)
我的也是啊~平板很久才有单菌落而且很少~现在也不知道用什么温度~怎么解决~
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虚心求教
4楼2014-05-19 09:43:49
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