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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-05-12 22:34:50:
72℃估计还不够,这只是普通延伸的温度啊。我自己做的荧光定量,目的片段在熔解曲线上的峰对应的温度一般在80~85℃之间,我觉得这个温度可以在80度上下。我还是上一个回复那个意思:具体取几度,应该可以参照熔解 ...

斑竹您好,这是我用三步法扩增时得到的溶解曲线,设置在72度读数,不过后面有个小峰,我不知道会不会影响最后的读数,我总共做了几十个样本,只有这四个(平行样)后面有小峰。。。能否给点意见?是否需要重新做一下?


11楼2012-05-20 23:06:35
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

后面的峰肯定不是引物二聚体了,解链温度这么高。可能是非特异扩增,你可以跑个电泳看看有没有条带。个人意见,仅供参考哈
12楼2012-05-20 23:39:43
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学术问题

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-05-12 15:39:48
呵呵,不好意思,孤陋寡闻了,之前没听说过有这么做的
刚看了下天根的资料,有提到如果有引物二聚体怎么处理,其中一个方法是“在延伸反应结束之后加上一个温度(高于引物二聚体解链温度而低于目的片段解链 ...

可以具体发一个程序图吗?是在每一个循环后加一个79度 5s 吗?比如我用的这个程序怎么改?
定量PCR读取荧光值的步骤需要保持多长时间?
6.png

微生物小硕
13楼2013-10-09 10:58:31
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