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PCR 已有5人参与
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我今天做PCR时做了一个阴性对照（就是没有加模板）但是确有引物二聚体的带，还有目的基因的带（不过不是太亮，就有一点），这是什么原因造成的？求各位虫友帮忙分析下 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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孙启亮
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2楼2012-05-08 22:59:04
凌波丽
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出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。可能原因如下： 引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染，导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决：①操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。②除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或 器材均应高压消毒。所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。③必要时，在加标本前，反应管和试剂用紫外线照射，以破坏存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染，这些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出PCR产物，而导致假阳性的产生，可用巢式PCR方法来减轻或消除。 |
3楼2012-05-08 23:23:30
atlanticwi
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4楼2012-05-08 23:34:44
孙启亮
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7楼2012-05-09 12:15:33
8楼2012-05-09 14:59:31
