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金虫 (小有名气)

[求助] 酶失活原因

我的酶最适反应温度30℃，我用细胞超声破碎仪破碎，体系5ml，超声2s，停10s，总时间50min.并且破碎时外层一直用冰敷着，还不停换冰。但破碎后酶失活了。对照组的没破碎的活性很高。请问高人，这种情况下，酶失活的原因是？

nothing isimpossible

1楼 2012-05-06 22:41:46

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木虫 (小有名气)

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-07 13:58:23

1 冰浴条件下进行
2 固定装样品的容器，使破碎仪始终处于菌液中间，保证破碎强度的平均分布
3 功率用20%强度，破碎10秒停10秒，具体用时要依据需要破碎的菌液，但时间不能过长，否则蛋白会变焦，从而失活
这是别人的一个条件，祝好运

2楼2012-05-06 23:31:37

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至尊木虫 (正式写手)

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-07 13:58:33

破碎功率不能随随便便的说百分之多少，因为不同的仪器最大功率是不一样的；此外探头的粗细不同效果也不同。最好调整一下你的超声功率，有时候并不是温度的影响，可以看出楼主在温度这一块控制的是十分严谨的。可能功率太大造成了蛋白的失活。如果还不行的话，可以试试反复冻融加溶菌酶来破碎菌体。

悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便

3楼2012-05-07 10:11:47

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