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hraikeyan

金虫 (小有名气)

[求助] 酶失活原因

我的酶最适反应温度30℃,我用细胞超声破碎仪破碎,体系5ml,超声2s,停10s,总时间50min.并且破碎时外层一直用冰敷着,还不停换冰。但破碎后酶失活了。对照组的没破碎的活性很高。请问高人,这种情况下,酶失活的原因是?
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nothing isimpossible
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-07 13:58:23
1 冰浴条件下进行
2 固定装样品的容器,使破碎仪始终处于菌液中间,保证破碎强度的平均分布
3 功率用20%强度,破碎10秒停10秒,具体用时要依据需要破碎的菌液,但时间不能过长,否则蛋白会变焦,从而失活
这是别人的一个条件,祝好运
2楼2012-05-06 23:31:37
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-07 13:58:33
破碎功率不能随随便便的说百分之多少,因为不同的仪器最大功率是不一样的;此外探头的粗细不同效果也不同。最好调整一下你的超声功率,有时候并不是温度的影响,可以看出楼主在温度这一块控制的是十分严谨的。可能功率太大造成了蛋白的失活。如果还不行的话,可以试试反复冻融加溶菌酶来破碎菌体。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
3楼2012-05-07 10:11:47
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