24小时热门版块排行榜    

查看: 2546  |  回复: 15

冰岩8625

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以多做几个体系,试一下条件如,20、40微升,就可以知道什么原因了。一同一批次中,一般不会有某一管有问题吧~~~??!!
11楼2012-05-24 19:01:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰岩8625

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以多做几个体系,试一下条件如,20、40微升,就可以知道什么原因了。一同一批次中,一般不会有某一管有问题吧~~~??!!
12楼2012-05-24 19:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰岩8625

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以多做几个体系,试一下条件如,20、40微升,就可以知道什么原因了。一同一批次中,一般不会有某一管有问题吧~~~??!!
13楼2012-05-24 19:02:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q307078056

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by faile18 at 2012-05-05 01:13:13
多做几管不担心某一管出现错配吗?...

有很多办法确定你的技术性重复是否有误的呀..
譬如:PAGE电泳、荧光重复性..
人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
14楼2013-04-21 08:47:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panyuzhu

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

15楼2013-04-21 10:19:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

还是PCR扩增的专一性问题
Mg2+浓度:Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特 异性,浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。一般Mg2+离子浓度可以从1mmmol/L逐渐上升,到10mmmol/L就不要再高了,每次上升Mg2+离子浓度的梯度为1mmmol/L。  
PCR循环条件和反应体积的改变:PCR循环25次也就差不多了,再往后可能扩增的专一性就不一定能保证了,高手除外。通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul,应用多 大体积进行PCR扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul 后,再做大体积时,一定要模索条件,否则容易失败。
引物:既然你过去都能成功,估计引物序列问题不大,但是要调整引物浓度和其与模板的结合温度。
总体上,最先检查模板质量和酶质量,再调Mg2+浓度,接着调引物浓度和其与模板的结合温度,再控制循环次数和反应体积,这些都不行,那就要重新设计引物。另外,考虑热启和加入少量BSA也有利于专一性PCR扩增。
16楼2013-04-21 12:11:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 faile18 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 东南大学364求调剂 +4 JasonYuiui 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:36 by Linda Hu
[文学芳草园] 伙伴们,祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 301求调剂 +3 归零lbm 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:20 by JourneyLucky
[考研] 332分材料工程调剂 +3 莓好时光海苔 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:03 by JourneyLucky
[考研] 一志愿郑大070303,338分,求调剂 +4 dadawaf 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:20 by lsw010101
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 求调剂(材料与化工327) +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考研] 一志愿:武汉理工,材料工程,英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
[考研] 294 英二数二物化 求调剂 +6 米饭团不好吃 2026-03-09 6/300 2026-03-09 23:55 by barlinike
信息提示
请填处理意见