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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 毕赤酵母表达问题求教
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匿名

用户注销 (小有名气)
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11楼2013-02-28 21:17:12
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by feilinshiji at 2012-05-04 00:25:58
原核蛋白为什么要用酵母表达？？？原核蛋白在真核表达系统中有活性吗？？？目的基因有没有突变导致提前终止？

一般都是在原核中的蛋白表达量太低了才用这个的……没办法啊
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一花一世界、一叶一菩提
12楼2013-04-17 22:11:15
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李朋彦13

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wurenzhi0721 at 2012-08-14 22:50:13
好厉害啊...

大家帮忙下，请问谁有GS115/yps1菌株！急用！
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13楼2013-04-25 22:25:06
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doughtiness

新虫 (小有名气)
你好，楼主！请问你后来做的那个来源于细菌中的基因最后在酵母中表达情况以及酶活怎么样呢？我最近也在做这个，我的目的基因有40KD左右
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14楼2013-07-24 16:00:48
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by doughtiness at 2013-07-24 16:00:48
你好，楼主！请问你后来做的那个来源于细菌中的基因最后在酵母中表达情况以及酶活怎么样呢？我最近也在做这个，我的目的基因有40KD左右

你好，请问你的问题解决了么。蛋白酶成功表达了么？
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自信加努力成就人生
15楼2013-12-12 11:00:52
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by post_ngao at 2012-05-03 20:38:58
原始的毕赤酵母确实存在着蛋白酶，不过现在一般的工程菌都是蛋白酶敲除型的，你可以在网上查一下你的毕赤酵母的型号，比如GS-115等，就可以知道是否为蛋白酶敲除型的了。

另外我看你用的质粒是pPICZ9K，9K可以跨 ...

学习了
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自信加努力成就人生
16楼2013-12-12 13:18:24
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by post_ngao at 2012-05-03 10:16:36
第一，细菌来源的蛋白为什么要用酵母表达？原核蛋白用E coli就可以了啊。
第二，就算你要用毕赤酵母表达，那么你的原核来源基因是否经过优化？因为毕赤酵母中是存在非通用密码子的。
第三，分子量变小，第一时间必 ...

你好，我现在用毕赤酵母GS115表达一个蛋白，用的pPICZaA载体可以表达到上清中的，可是现在上清中没有，老师想验证一下是不是在胞内，我现在取了四天的样每天1ml，收集上清和菌体，这些菌体的话用什么方法可以有效的提取目的蛋白？
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简简单单才是真
17楼2015-06-17 15:10:43
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post_ngao

木虫 (正式写手)

科研宅
引用回帖:
17楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-17 15:10:43
你好，我现在用毕赤酵母GS115表达一个蛋白，用的pPICZaA载体可以表达到上清中的，可是现在上清中没有，老师想验证一下是不是在胞内，我现在取了四天的样每天1ml，收集上清和菌体，这些菌体的话用什么方法可以有效的 ...

如果是在菌体里面就比较麻烦，因为这个质粒没有纯化标签，很难和杂蛋白分开，也只能考虑用离子交换柱来一点点分离了。不过如果你表达在了菌体里面，那很有可能是质粒有问题了，目的蛋白前面的信号肽可能丢失或突变了，应该重点测序检查一下。

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天命所归，各安其位
18楼2015-06-17 23:26:25
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by post_ngao at 2015-06-17 23:26:25
如果是在菌体里面就比较麻烦，因为这个质粒没有纯化标签，很难和杂蛋白分开，也只能考虑用离子交换柱来一点点分离了。不过如果你表达在了菌体里面，那很有可能是质粒有问题了，目的蛋白前面的信号肽可能丢失或突变 ...

恩恩
现在有三个问题：首先，刚开始做的这批理论上是分泌表达的，但是上清中没有，很奇怪的是电泳 的时候前两天还有杂蛋白的带呢，后两天的胶上就什么都没有了，跑了两边都是这样，不知道什么问题呢？
其次，因为上清中没有 ，老师让破碎下酵母看是否是因为太大没有分泌出去，要我破碎酵母提蛋白电泳，目的是验证有没有表达。有什么好的破碎方法吗？
最后，我做的是个乙醛脱氢酶，老师的意思是在胞内表达也是可以的，如果把信号肽去掉的话对表达有影响吗？
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简简单单才是真
19楼2015-06-18 20:08:24
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我是小披风

新虫 (初入文坛)
毕赤酵母表达常用载体与14种培养基配方大全
http://elabbuy.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=247&fromuid=27
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20楼2015-07-15 08:09:18
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