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post_ngao

木虫 (正式写手)

科研宅

BioEPI: 1
应助: 14 (小学生)
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在线: 61.8小时
虫号: 1692067
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专业: 生物无机化学

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+50, BioEPI+1, 楼主奖励 2012-05-03 15:43:32

第一，细菌来源的蛋白为什么要用酵母表达？原核蛋白用E coli就可以了啊。
第二，就算你要用毕赤酵母表达，那么你的原核来源基因是否经过优化？因为毕赤酵母中是存在非通用密码子的。
第三，分子量变小，第一时间必须果断测序，仔细检查是否存在移码突变、点突变等的问题，还必须考虑非通用密码子的问题。
第四，没有酶活力，除了序列的问题，我个人感觉还有使用毕赤酵母的原因。因为用酵母最多的就是在利用它的糖基化能力，而毕赤酵母的过糖基化是出了名的，并且N、O糖基化位点很难预测。你的蛋白是原核来源的，它在行使催化功能的时候是不需要糖基化的，如果给它强加入糖基化非常有可能堵住底物通道或者使得cap有位阻打不开，就属于多此一举了。
第五，同一个蛋白序列，用E coli和酵母分别表达时，其最终的折叠状态也是不同的，这也可能是没有活力的原因之一。

所知信息不多，只能大致说说，具体情况还得具体分析。有需要可以联系我。