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落雪含香

金虫 (正式写手)

[求助] 共聚焦显微镜和荧光显微镜区别

我看文献中描述,在观察一种荧光染料进入细胞的情况时,先用DAPI染了细胞核,用荧光显微镜观察完还要用共聚焦显微镜观察,有区别吗?我怎么觉得用荧光显微镜就可以了啊,细胞核蓝色,荧光染料红色,在细胞质中,看的很明显啊,为啥还要用共聚焦显微镜啊?
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+3, BioEPI+1, 欢迎专业的虫友经常来交流哈` 2012-04-29 09:45:05
落雪含香: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 太棒了,我觉得您解决我一大难题,谢谢您! 2012-05-01 12:52:28
两者的区别有点象医院照X光和做CT。
事实上激光共聚焦是荧光显微镜的升级版。传统荧光显微镜是用汞灯或氘灯照射整个样品平面,再进行观察或用CCD设备拍得图像。由于聚焦平面上下的平面上也有荧光被激发,因此结果图像会被干扰,同时目标样品区域同一平面上其他部分的荧光也可能干扰观察结果。激光共聚焦显微镜用激光光源在样品上逐点成像解决这个问题,因此其成像更加清晰。此外,激光共聚焦显微镜分辨率有提高(使用特殊光源如紫外光),还可以逐层扫描三维成像,利用多通道采集图像的功能同时获取不同光谱段的荧光信号获得叠层图像。
对于DAPI染色,用荧光显微镜就可以获得结果,有文章同时用两种方法,我估计是由于激光共聚焦设备配备成本较高,没有荧光显微镜普遍,因此在使用荧光显微镜获得结果的情况下再用共聚焦获得高质量图片。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-04-29 04:26:39
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普通回帖

清泉

木虫 (著名写手)

同意楼上看法,我也经常这么做!
宝剑锋从磨砺出,梅花香自苦寒来!
3楼2012-05-01 15:43:56
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O啦啦

新虫 (小有名气)

请问细胞核染料 是在哪一步添加啊?
4楼2017-09-19 11:21:27
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落雪含香

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by O啦啦 at 2017-09-19 11:21:27
请问细胞核染料 是在哪一步添加啊?

给细胞染料跟给药一样的呀,用细胞培养基稀释染料,孵育细胞几个小时后,洗涤细胞,观察
5楼2017-09-19 15:23:13
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