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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

[求助] 筛选重组子

最近要做原核表达,用BL21(DE3)菌株,这个菌株是没有任何外源载体和抗性的,我要转化的载体和重组载体都只有一个抗性基因,也就是说重组子和自连的表达载体具有相同的抗性且只有一个抗性,像这样的话应该怎样筛选重组子,有没有办法?  谢谢各位大侠了!!!


说明:在抗性培养基中长出的菌落有可能含有重组子,也有可能含有自连的表达载体。应该怎样筛选?  难道真要一个一个的挑取单菌落,在摇菌培养,提取质粒电泳检测吗?   麻烦呀!!!
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勤能补拙
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chaovt714

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-04-29 16:45:27
这种情况有点像构建广库,像这样的话一般将载体酶切后连接之前进行去磷酸化处理,这个可以降低自连出现的机率,重组子转化后划线扩增培养,再进行快速裂解与原质粒对照大小初步检测。。。
5楼2012-04-28 19:50:41
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-29 16:44:57
一般都是在别的菌里把质粒构建好,然后再转到BL21(DE3)里,转进去提质粒验证大小对了就可以了。
未来不是梦
2楼2012-04-28 11:32:50
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zhsDONG

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-29 16:45:04
可以跑质粒快检呀!初步鉴定是不是重组质粒呀!在做下一步判断啊。
3楼2012-04-28 13:45:53
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 专家考核, 鼓励 2012-04-29 16:45:14
提质粒电泳太麻烦了,做菌落PCR快速。
4楼2012-04-28 16:04:54
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