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芥末猫

银虫 (小有名气)

[交流] 菌液pcr有带,扩大培养摇不起来 已有7人参与

菌液pcr是用的目的基因的引物,有带,想扩大培养但是一直没摇起来,怎么回事啊?一共有四个,其中一个摇起来了,另外三个死活摇不起来了。
    没摇起来证明是没连接上,还是怎么的,因为理论知识相对匮乏,求准确解答,感谢
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-28 13:32:11
第一,有可能是由于PCR假阳性,连接片段没有进入细胞,而是站在细胞或培养基表面。第二,有可能是由于抗生素浓度过高,虽然通常液体培养基的抗生素浓度相对于固体培养基减半,但是有时候,可以降低得更多一些。如果可以,不妨做一下抗生素浓度梯度,减半,三分之一,四分之一,等等。看一下是否可以摇出来。
11楼2012-04-28 12:48:09
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张宏宇123

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你做菌落pcr的时候有没有加对照,有时候会出现假阳性。
未来不是梦
2楼2012-04-27 12:42:43
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steler_ly

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
极有可能是假阳性。。。
3楼2012-04-27 17:59:36
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 应助指数+1, atlanticwi是很细心的虫虫呢 2012-04-27 19:16:51
嗯..........
我觉得不一定是假阳性哦,若你用的引物能扩出合适分子量来,就没有什么问题的。同时培养基加入抗生素后也尽量摇匀咯,菌虽然好养,但也不是加进培养基就不用管了,注意保持一定的装量,液体不要超过你瓶子或管子容量的50%以上,否则通气量过低,摇不起来也是很麻烦的。
个人看法,若有说错请高手指点
Let God do with it as He wills
4楼2012-04-27 18:44:13
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