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jingyi_180银虫 (正式写手)
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[求助]
功能基因扩增相关
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跨专业做这个太难了，所以必须来小木虫求助了。 问题1：提取纯菌和环境样品中的总DNA后的下一步是不是必须进行DNA纯化？我的目的是扩增功能基因。 问题2：怎么样寻找或者是判断你获得的功能基因序列是完整的？ 问题3：我注意到目前很多研究功能基因序列的都是不完整的，如果要研究蛋白表达是不是一定要完整序列才行？还有为什么只要扩增到功能基因的片段序列就可以说明这个菌种具有这个功能？ 以上问题google也找不到，所以希望热心的虫子们帮我解答一下。 |
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ctt1984
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西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-29 17:20:22
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-29 17:20:22
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谢谢这位同学回复，但是可能你不是做细菌多样性的。因此做的建议我觉得不行。还望楼主仔细甄别。 1，楼主要做的是提取基金组DNA，之后做PCR扩增。这个和质粒没多大关系。当然我们做基因改造或者表达蛋白时候需要通过质粒来完成，这时候需要质粒这个媒介。但是在这里显然是不对头的。 2，这点你说的没错，但是那是研究基因的方法和策略，而且楼主问的东西也没那么高深，你说得这些东西有用，但是在这里很容易把刚接触的人弄得更迷糊。 3，你的话还是对的，但是真的文不对题。 总之谢谢你解答，也花了不少时间。但是我觉得你没搞明白楼主想得到的信息就给出一系列答案，而这些答案隐蔽性有很强，很容易误导人。所以我出来纠正一下，对事不对人，因为我分子生物学也是半调子，说得不对还望海涵。 |
13楼2012-04-29 07:17:27
cheng_xiao
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【答案】应助回帖
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jingyi_180: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-04-25 17:00:13
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励正确解答问题 2012-04-27 08:38:37
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jingyi_180: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-04-25 17:00:13
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励正确解答问题 2012-04-27 08:38:37
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1. 这个不一定，你可以不用纯化，只要你能够扩增出来就行 2. 一般完整的功能序列有起始密码子和终止密码子，由于你是从DNA中扩增，所以可能存在内含子，如果是这样，你可以比对进一步确定。 3. 对，表达一般是需要完整序列的。 是这样的，菌的基因较少，所含的无功能基因基本没有，所以只要你确定这个基因在了，基本上就确定它行驶功能。 说的不全，多多包涵，实验顺利 |
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jingyi_1802楼2012-04-25 14:25:35
jingyi_180
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