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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定量PCR96孔板加样问题
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swimmingcrab

铜虫 (小有名气)

[交流] 定量PCR96孔板加样问题 已有9人参与

最近做定量要用到96孔板，加样时有气泡又没法离心，不知大家有什么高招可以避免这个问题呢？
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1楼 2012-04-24 14:06:23
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chlorella409

木虫 (正式写手)
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西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-24 18:38:28
加样的时候可以用倒加法，枪按到第二档吸液，排液时按到第一档。相同的成分还可以配好mixture,再分装。还有就是可以买个板式离心机，国产的就行。四楼说的也对，预变性那步，那么高的温度气泡就破了。
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7楼2012-04-24 17:10:19
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-24 18:38:09
加完样后小心的用手甩一下，不过这个需要技术，可以先拿跑废的板子找一下感觉。其实即使有点气泡也问题不大，在预变性和变性那一步，气泡一受热就没了
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2012-04-24 15:53:59
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加样时先加量大的成分，你可以混好体系再分装，加样时尽量打到枪的第一档。不知道还有没有其他高照没？
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hehe
2楼2012-04-24 14:21:35
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swimmingcrab

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-24 14:21:35:
加样时先加量大的成分，你可以混好体系再分装，加样时尽量打到枪的第一档。不知道还有没有其他高照没？

那还是加样的时候小心点喽。枪只打到第一档会不会存在加样量不准确的问题呢？
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3楼2012-04-24 15:05:09
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xudabin98

木虫 (正式写手)
★
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为什么不能够离心呢？你们实验室没有板式离心机吗？如果没有的话，盖上膜使劲甩上几圈也没多大问题。
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6楼2012-04-24 16:38:54
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土星人79

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-04-24 17:10:19:
加样的时候可以用倒加法，枪按到第二档吸液，排液时按到第一档。相同的成分还可以配好mixture,再分装。还有就是可以买个板式离心机，国产的就行。四楼说的也对，预变性那步，那么高的温度气泡就破了。

国产有这种专用离心机，甩一下就好
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9楼2012-04-24 23:00:29
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)
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小丹木木: 金币+2, 欢迎新虫 2012-04-25 13:52:56
我一般先配好mix，分装时贴壁加，最后一下吹枪的时候要快；
最后再加入5ul模板，由于体积大，液体会自动贴壁滑下去的，因此不会有气泡。
最后，在超净台面顿两下，让少量挂壁液体也全沉到管底。
不离心，不振荡，结果也挺好的
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swimmingcrab
偶时晴天偶时雨
11楼2012-04-25 08:55:58
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vinner

木虫 (正式写手)
小抽一下真空
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5楼2012-04-24 15:54:44
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swimmingcrab

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2012-04-24 15:53:59:
加完样后小心的用手甩一下，不过这个需要技术，可以先拿跑废的板子找一下感觉。其实即使有点气泡也问题不大，在预变性和变性那一步，气泡一受热就没了

有道理，谢谢！
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8楼2012-04-24 19:51:49
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swimmingcrab

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 土星人79 at 2012-04-24 23:00:29:
国产有这种专用离心机，甩一下就好

这个。。。估计老板不会给买
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10楼2012-04-25 08:34:20
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