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苗苗09

金虫 (正式写手)

[求助] TLC HPLC

点硅胶板时只有一个点，而HPLC分析后却又四个分，请问下一步该怎么办？是做次级代谢产物提取的，最后样品量很少很少。
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乐在其中
1楼 2012-04-20 20:18:02
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zhouhaoa

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
soundhorizo: 应助指数+1 2012-04-21 00:11:46
苗苗09: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-04-21 09:02:17
楼主的HPLC是制备吗？是制备的话就可以直接分离了啊，如果不是的话可以尝试换个极性或者换体系来点板，让四个点能在TLC上找到，然后考虑柱层析或者制备薄层来分离。
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2楼2012-04-20 23:45:39
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苗苗09

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouhaoa at 2012-04-20 23:45:39:
楼主的HPLC是制备吗？是制备的话就可以直接分离了啊，如果不是的话可以尝试换个极性或者换体系来点板，让四个点能在TLC上找到，然后考虑柱层析或者制备薄层来分离。

是分析型的，别的也试过了还是分不开啊
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乐在其中
3楼2012-04-21 09:02:04
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xxaijwd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2, 感谢应助 2012-04-23 06:32:55
不管怎样，只要HPLC4个点，就说明你的样品至少含有4个组分，所以还是要想办法在TLC上分开才行啊。实在不行就找根半制备柱制备吧。
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苗苗09
4楼2012-04-21 12:20:04
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yteamoy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
苗苗09: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢指点！ 2012-04-21 12:55:33
soundhorizo: 金币+2, 感谢应助 欢迎常来啊 ^^ 2012-04-22 02:26:26
你好，又看到你的帖子了！
我做过制备HPLC的分离纯化,j步骤如下：
1.在分析型HPLC上摸索出分离条件（流动相，样品浓度）
2.保留与分析型一样的条件（样品浓度，流动相配比和填充粒子直径一样），以20倍的上样量，10倍的流速上制备型HPLC进行纯化！
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好好活着，少干点傻事！
5楼2012-04-21 12:51:55
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苗苗09

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by xxaijwd at 2012-04-21 12:20:04:
不管怎样，只要HPLC4个点，就说明你的样品至少含有4个组分，所以还是要想办法在TLC上分开才行啊。实在不行就找根半制备柱制备吧。

谢谢！
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乐在其中
6楼2012-04-21 12:55:56
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hdldxmc

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yteamoy at 2012-04-21 12:51:55:
你好，又看到你的帖子了！
我做过制备HPLC的分离纯化,j步骤如下：
1.在分析型HPLC上摸索出分离条件（流动相，样品浓度）
2.保留与分析型一样的条件（样品浓度，流动相配比和填充粒子直径一样），以20倍的上样量 ...

那两个很难分离的物质用tlc找极性时出现拖尾而且托的很长该怎么办那
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7楼2012-04-22 09:08:30
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yteamoy

银虫 (小有名气)
★ ★
soundhorizo: 金币+2, 感谢应助 2012-04-23 06:33:57
出现拖尾的原因是：
1.可能样品浓度过高
2.点样量过大
建议减少点样量和样品浓度  
样品浓度一般较低比较好，这样可以通过增加或减少点样次数来控制显色效果
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苗苗09
好好活着，少干点傻事！
8楼2012-04-22 09:31:28
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苗苗09

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by yteamoy at 2012-04-22 09:31:28:
出现拖尾的原因是：
1.可能样品浓度过高
2.点样量过大
建议减少点样量和样品浓度  
样品浓度一般较低比较好，这样可以通过增加或减少点样次数来控制显色效果

谢谢哦！
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乐在其中
9楼2012-04-22 11:11:33
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zhouhaoa

木虫 (小有名气)
★ ★
soundhorizo: 金币+2, 鼓励讨论 2012-04-23 06:34:43
引用回帖:
8楼: Originally posted by yteamoy at 2012-04-22 09:31:28:
出现拖尾的原因是：
1.可能样品浓度过高
2.点样量过大
建议减少点样量和样品浓度  
样品浓度一般较低比较好，这样可以通过增加或减少点样次数来控制显色效果

除了上述原因以外还可以尝试跑板时加一点酸（乙酸）或者加一点碱（三乙胺）看看会不会有改善。
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苗苗09
10楼2012-04-22 23:52:41
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