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Help！酶活性突然变低，找不到原因！
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各位前辈，我的实验是筛菌工作，我好不容易筛到一株蛋白酶活性比较高的细菌，心里很开心。但是在深入研究这株菌的最适pH的时候这株菌出问题了，酶活性突然变得很低很低。又重复做了好几次酶活性实验，还是很低，就在我绝望的时候有一次活性又高起来了。为了排除菌的因素，我把酶活高的发酵液拿来重新涂了平板，长出来单菌落再接种子液和发酵液再测酶活，结果活性又很低很低。我不明白哪里出了问题，都是摇16个小时的种子液，再摇48小时发酵液，药品也一样，菌是我之前筛选得到的，在接种子液之前都划线分离6次以上。但是发酵液离心后菌体沉淀的颜色都不一样，请各位前辈帮我分析分析问题究竟出在哪里呢？ 图中沉淀多的是酶活性高的那一次离心得到的，沉淀少的是酶活性低的这一次离心得到的。  发酵液离心 [ Last edited by nancyyazi on 2012-4-20 at 15:23 ] |
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daiybe
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11楼2012-04-23 12:28:51
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【答案】应助回帖
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amisking: 金币+4, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-20 18:09:57
nancyyazi: 金币+10 2012-04-20 19:24:04
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nancyyazi: 金币+10 2012-04-20 19:24:04
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首先，怀疑不纯，或不稳定。或是发酵过程中染菌了。 其次，假设你已经分纯： 第一，你的检测方法应该没问题吧。 第二，你说菌体沉淀颜色不一样，你确定不是存放的时间长，变了颜色？或者是因为生长量不一样，所以看起来有区别？怀疑：因为培养条件有所变化，比如说，培养基的配制，灭菌温度的不同导致营养成分的变化，pH的不同，通气量的不同等等等等，导致你的菌产酶少。 第三，你可以试试监测不同发酵时间的酶活，看看是不是后期下降了，或是还未达到产酶高峰。 最后，这菌一般不会相我上面说的这么脆弱吧？你是产蛋白酶的菌，你试试不加碳源，只用蛋白胨培养试试。你看酶活高不高。 暂时就想到这些。 |
3楼2012-04-20 17:49:36
4楼2012-04-20 19:23:54
bigboy2050
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5楼2012-04-21 08:49:05