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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 小麦谷蛋白凝胶电泳，样品打不进泳道，总是浮起来，急死了
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xiaolanzi

新虫 (小有名气)

[求助] 小麦谷蛋白凝胶电泳，样品打不进泳道，总是浮起来，急死了

做小麦谷蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳，所用的上样缓冲液是提取液D: 0.625 mol/L Tris-HCl (pH=6.8)+5％ 巯基乙醇+20％甘油+2％ SDS+0.2%溴酚蓝，样品打不进泳道总是浮起来，想求助大家到底是哪有问题啊，样品我都提了两次了，急死了

提取方法是：提取液A: 50％异丙醇; 提取液B: 50％异丙醇+0.04 mol/L Tris-HCl (pH=8.0)+10% SDS+2％二硫苏糖醇(DTT); 提取液C: 50％异丙醇+0.04 mol/L Tris-HCl (pH=8.0)+10% SDS+1.4％4-乙烯基吡啶(VP); 样品是30mg
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1楼 2012-04-18 21:26:40
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liliinjn

金虫 (小有名气)
正负极有没有接反？
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2楼2012-04-19 10:26:05
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
增加loading buffer？看看是否可以解决上浮问题。
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3楼2012-04-19 18:58:16
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chibang1220

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那是因为样品密度太小把TE浓度减小或者增加样品浓度不行吗
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人的差别在于业余时间
4楼2012-04-19 20:40:24
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xiaolanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liliinjn at 2012-04-19 10:26:05:
正负极有没有接反？

没有接反啊，就是点样的时候都点不进去，还没有接正负极
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5楼2012-04-19 23:57:10
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xiaolanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoyang123 at 2012-04-19 18:58:16:
增加loading buffer？看看是否可以解决上浮问题。

是增加上样缓冲液吗，我加的是150微升，样品大概就是300微升
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6楼2012-04-19 23:58:06
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xiaolanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chibang1220 at 2012-04-19 20:40:24:
那是因为样品密度太小把TE浓度减小或者增加样品浓度不行吗

这个TE浓度是什么·····不太明白·····
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7楼2012-04-20 00:06:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
浓缩一下蛋白质样品试试看，可以用超滤或离心，然后再电泳上样。
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8楼2012-04-20 00:21:55
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chibang1220

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by xiaolanzi at 2012-04-20 00:06:53:
这个TE浓度是什么·····不太明白·····

就是跑电泳时电泳缓冲液浓度
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人的差别在于业余时间
9楼2012-04-20 00:46:07
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ysy000000

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能是电泳槽里的电泳缓冲液 浓度过大了 你再检查一下 是不是 配成10倍了
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劳其筋骨，饿其体肤。
10楼2012-04-20 08:29:30
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