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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助关于EB电泳的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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terry130

木虫 (正式写手)

[交流] 求助关于EB电泳的问题

琼脂糖浓度1.4%，北京六一的水平电泳槽（20cm)和电泳仪。凝胶中EB含量万分之零点五，电泳电压70－100V，缓冲液是1×TAE。

以上是我电泳的条件，结果跑完后胶板的上半部分发红色，严重影响照片质量。感觉好像是EB在胶中反向迁移造成的，不知道是不是我的条件设得不对（我是按分子克隆上得说明做得啊），请问高手如何解决这样的问题。
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摒气动方息，宁神心自明。
1楼 2007-04-03 12:54:15
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lsyiming2008

铁虫 (初入文坛)
你跑的是多大的片段？
条带清楚吗？
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2楼2007-04-03 13:02:56
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lsyiming2008

铁虫 (初入文坛)
怀疑你的质粒被DNase污染了
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3楼2007-04-03 13:14:26
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breath2006

银虫 (初入文坛)
★
whxhxq(金币+1):ｔｈａｎｋｓ！
感觉好像是EB在胶中反向迁移造成的 这个是不可能的 EB没有结合东西怎么可能显示出颜色来，你的EB都万分之0.5了 不可能是浓度过高的原因，（浓度过高也可能是胶体是红色，但决不是半块胶红色 ，而是整块的，）所以，我给你几个可能原因：
1。 你的胶是不是被污染了。
2。电泳buffer是不是也有问题，如果不是新的换。
3。再有就是你的梳子是不是有问题，是不是有以前跑的DNA之类的污染。
总之我认为你的是污染问题 决不是什么Eb跑到负级了
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4楼2007-04-03 21:46:25
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zhangdian225527

铜虫 (小有名气)
我们 以前用过3%的胶,也是六一的电泳槽 ,一点问题没有. 建议你先电泳, 然后EB染色20分钟就可以了.
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5楼2007-04-03 22:06:31
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biology1986

铜虫 (小有名气)
EB致癌性是不是很强啊?  ...我还在读本科 今天也正好做了琼脂糖凝胶电泳实验,跑的结果好差 ~ ~
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6楼2007-04-03 23:10:21
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lys6827

木虫 (著名写手)
我们实验室是这样配制检测胶的：称琼脂糖1g，加TAE100ml，溶胶后稍微冷却加EB 2微升。还有胶最好先配先用
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7楼2007-04-03 23:31:49
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terry130

木虫 (正式写手)
还是有些不解，如果是胶或梳子污染的话为什么只有前半块变红，而且红的程度还相当的一致呢。。。不理解。EB不结合DNA就不显色吗？我记得只是荧光效率降低20倍左右，还是有颜色的吧。谁知道电压5v/cm是不是高啊？？？

最后还是感谢各位朋友的帮助，谢谢～～
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8楼2007-04-04 15:18:59
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breath2006

银虫 (初入文坛)
我不知道你在跑你的胶之前，你的电泳槽，电泳梳子 电泳板是否都清洗过，还是直接用别人用过的，如果是都清洗了的，那你就看你的琼脂糖的配置过程中是否污染。 当然这都是考虑在你的电泳过程中，如果你是其他的污染，那我也就无法判断，还要考你自己努力去寻找。（另外，如果条件允许你换个琼脂糖看看）
  
楼上有个虫兄也说了，你先跑电泳，再染色可能会好点。你自己试试看。可能会改变。至于到底是什么原因这个谁也说不好，因为试验是你做的别人也是瞎猜。
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9楼2007-04-04 16:30:09
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莲子

我们实验室经常做胶,从来没有出现这种情况呀!而且我们的TAE都好几天才换呢,我想应该不是污染的问题哦!再找找其他的原因吧!
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10楼2007-04-04 17:40:18
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