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menglinyan新虫 (小有名气)
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做了半个月的RAPD标记，为什么一条带都没有啊，速救！
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在做麦冬的分子标记，是RAPD，按道理说，这个技术已经很成熟了，可是我就是死活跑不出来条带啊，做了半个月了，中间有次出来条带了，但是都很模糊，我设置的温度梯度是38-45之间，再低的都跑不出来，只有这个跑出来了一次。后来我用相同的DNA，引物，MIX，条件也相同，在做的时候又没有条带了。 我想问问大家： 1 引物会那么容易降解吗？每次在加样的时候才拿出来，就那么一会儿它会降解吗，如果真的降解了，那之前还跑出来一次，怎么解释。 2 温度梯度一般都多少呢，RAPD标记的温度大概都一样吧？应该在36度左右吧，可是我跑了很多次34-38度都没条带，唯一的那次有条带还是38-45度的。 我用的DNA都没有问题，因为师妹用相同的DNA做RAMP标记，效果都很好。我想知道还有哪些方面是我没有注意到的，导致实验失败的地方。 请大家帮帮吧，马上都毕业了，实验还没完，心里好着急，不能总是跑白板啊，我都快崩溃了，哎。  |
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11楼2012-06-08 12:33:01
menglinyan
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4楼2012-04-15 14:12:04