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Aniabia

木虫 (正式写手)

[求助] 请问有人用DAPI染过大肠杆菌吗?急求助

我是这么做的:
1、离心细菌后,加入PBS离心洗去培养基
2、加入0。02%的Triton-X100,冰上放置10min,然后离心弃去上清液
3、加入4%的多聚甲醛,室温放置10min,离心;加入PBS洗去多余多聚甲醛,离心。
4、加入浓度为0.01ug/ml的DAPI,避光放置10min,然后离心。
5、加入PBS洗去多余的DAPI
6、加入PBS重悬菌体,滴10ul到载破片,于荧光显微镜下观察。

其中一次实验,似乎看到类似大肠杆菌的发光体(附图,其中一张是在明场下照的),其他3次都染不出来。

我不知道为什么另外三次都染不出来,同时,染出来的那次,菌体形状也不太像大肠杆菌啊。



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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

用过,不好操作,很烦,弃用了DAPI,改用live/dead了。
环境卫生、微生物学、卫生应急
2楼2012-04-13 11:19:23
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Aniabia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mizhoulong at 2012-04-13 11:19:23:
用过,不好操作,很烦,弃用了DAPI,改用live/dead了。

当时你们用DAPI能染出来吗
3楼2012-04-13 15:37:22
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

几年前做的,印象不深了,当初应该是可以的。

这个按照操作说明一步步往下做就是了,但是因为不太好控制,不如用成品的试剂盒代替,就是稍微贵了点。
环境卫生、微生物学、卫生应急
4楼2012-04-13 15:44:29
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