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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请问有人用DAPI染过大肠杆菌吗？急求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Aniabia

木虫 (正式写手)

[求助] 请问有人用DAPI染过大肠杆菌吗？急求助

我是这么做的：
1、离心细菌后，加入PBS离心洗去培养基
2、加入0。02%的Triton-X100，冰上放置10min，然后离心弃去上清液
3、加入4%的多聚甲醛，室温放置10min，离心；加入PBS洗去多余多聚甲醛，离心。
4、加入浓度为0.01ug/ml的DAPI，避光放置10min，然后离心。
5、加入PBS洗去多余的DAPI
6、加入PBS重悬菌体，滴10ul到载破片，于荧光显微镜下观察。

其中一次实验，似乎看到类似大肠杆菌的发光体（附图，其中一张是在明场下照的），其他3次都染不出来。

我不知道为什么另外三次都染不出来，同时，染出来的那次，菌体形状也不太像大肠杆菌啊。
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1楼 2012-04-12 09:54:24
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
用过，不好操作，很烦，弃用了DAPI，改用live/dead了。
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环境卫生、微生物学、卫生应急
2楼2012-04-13 11:19:23
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Aniabia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mizhoulong at 2012-04-13 11:19:23:
用过，不好操作，很烦，弃用了DAPI，改用live/dead了。

当时你们用DAPI能染出来吗
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3楼2012-04-13 15:37:22
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
几年前做的，印象不深了，当初应该是可以的。

这个按照操作说明一步步往下做就是了，但是因为不太好控制，不如用成品的试剂盒代替，就是稍微贵了点。
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环境卫生、微生物学、卫生应急
4楼2012-04-13 15:44:29
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