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[求助]
DsRed2作为融合蛋白标签
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最近遇到了一个难题，我要表达一段原核膜蛋白，在膜蛋白的C段连接了一个红色荧光蛋白DsRed2，20度诱导，荧光监测，48h后荧光强度不再增加（此时菌体用肉眼观察已经非常红），收集菌体，高压低温破碎三次，14000rpm离心，但是离心后发现沉淀比上清还红,这是什么原因呢？离心后的沉淀不就是未破碎的细胞，细胞碎片，还有可能是包涵体么，怎么会比上清还红呢？如果是形成了包涵体应该看不到颜色呀.离心后的上清用detergent溶解过夜，然后20000rpm离心，发现上清一点也不红了，也是沉淀特别红，我的蛋白去哪了？郁闷，求教高手指教 |
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4楼2018-11-07 14:30:06
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
丫头7976: 金币+1, ★★★很有帮助, 我知道都在沉淀中，只是不是知道怎么办，文献中报道的说如果形成包涵体的话就不会有颜色了呀 2012-04-14 12:16:10
丫头7976: 金币+2, ★★★很有帮助, 我的蛋白形成聚集体了 怎么办 我想做FRET 蛋白不是单体咋办呢 至少是四聚体 2012-04-21 11:46:05
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丫头7976: 金币+1, ★★★很有帮助, 我知道都在沉淀中，只是不是知道怎么办，文献中报道的说如果形成包涵体的话就不会有颜色了呀 2012-04-14 12:16:10
丫头7976: 金币+2, ★★★很有帮助, 我的蛋白形成聚集体了 怎么办 我想做FRET 蛋白不是单体咋办呢 至少是四聚体 2012-04-21 11:46:05
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你可以电泳看看上清和沉淀中蛋白的情况，就知道你的蛋白到哪里去了 另外，包涵体会有颜色的，如果你连接GFP还会是绿色的呢 如果电泳确认是包涵体，就可以用尿素或者盐酸胍浓度梯度去溶解包涵体看看最佳的溶解条件 |
2楼2012-04-14 11:48:20
3楼2018-11-07 14:28:50
