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密码子插入的引物设计问题
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改造pET22b载体，现在信号肽中加入一个K，请问如何设计插入突变引物？ 如果是单纯的氨基酸置换突变的引物设计，比较容易设计，用overlap 但是插入突变呢？如果在引物中添加了3个额外的碱基，额外加入的碱基下游的其他原本基因上的碱基，在退火过程中还能与模板结合吗？ 请指教 |
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