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密码子插入的引物设计问题
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改造pET22b载体,现在信号肽中加入一个K,请问如何设计插入突变引物? 如果是单纯的氨基酸置换突变的引物设计,比较容易设计,用overlap 但是插入突变呢?如果在引物中添加了3个额外的碱基,额外加入的碱基下游的其他原本基因上的碱基,在退火过程中还能与模板结合吗? 请指教 |
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