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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
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小婧子zj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by kjxyzxh001 at 2012-04-11 19:51:37:
方框里面是同一个质粒酶切的，BamH1 和EcoR1 条带大小是一直的

但是酶切的条带和质粒不一致呀
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11楼2012-04-12 10:24:00
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kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小婧子zj at 2012-04-12 10:23:08:
但是两个都和质量大小不一致呀

我有有点郁闷，老外给的序列是4800多BP,但这个条带明显不符，测序结果还没出来
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12楼2012-04-13 11:44:05
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kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)
谢谢各位高手的指点，为了确定到底是不是一个质粒，小弟做了S1酶酶切的脉冲场电泳，S1酶将所有质粒都切开变成了线性，所以有几条带就是几个质粒。小弟做了做了三次才做出来，结果显示果然有好几条带，所以可以确定有好几个质粒。

三个泳道都是用S1酶处理的菌体制作的胶块跑出来的PFGE图，
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13楼2012-04-16 11:29:02
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rego_wang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是质粒提取过程中出现的问题，不是质粒的污染
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14楼2012-04-16 11:43:42
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chchen123

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
15楼2012-06-15 19:36:01
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yixinyuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

从图看同一个质粒酶切的，BamH1 和EcoR1 条带大小是一致的，所以不应该是污染，可能是提取质粒时手法不太小心，导致所提质粒以多种多形态存在，这种情况比较常见。再做一个双酶切看看，应该能说明问题，总的来说质粒的质量还是不太好的。
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16楼2012-06-15 22:06:08
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

说不定你的质粒是环套环形成了三连环，四连环的形式，不一定都是二聚啊。一旦切开了就分开了形成一条带。我觉得应该不是杂带污染。
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17楼2012-06-16 17:15:27
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pinmingyang

新虫 (初入文坛)
你好，你的条带分的跟清晰，我想知道你的胶浓度是多少？？
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18楼2014-07-07 11:07:16
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kjxyzxh001: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-07-16 16:45:31
这么纠结   实在不行   重新提一次  看看是自己操作原因还是菌本身的原因
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19楼2014-07-07 15:53:08
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