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小婧子zj

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by kjxyzxh001 at 2012-04-11 19:51:37:
方框里面是同一个质粒酶切的,BamH1 和EcoR1 条带大小是一直的

但是酶切的条带和质粒不一致呀
11楼2012-04-12 10:24:00
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kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 小婧子zj at 2012-04-12 10:23:08:
但是两个都和质量大小不一致呀

我有有点郁闷,老外给的序列是4800多BP,但这个条带明显不符,测序结果还没出来
12楼2012-04-13 11:44:05
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kjxyzxh001

铜虫 (小有名气)

谢谢各位高手的指点,为了确定到底是不是一个质粒,小弟做了S1酶酶切的脉冲场电泳,S1酶将所有质粒都切开变成了线性,所以有几条带就是几个质粒。小弟做了做了三次才做出来,结果显示果然有好几条带,所以可以确定有好几个质粒。

三个泳道都是用S1酶处理的菌体制作的胶块跑出来的PFGE图,
13楼2012-04-16 11:29:02
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rego_wang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是质粒提取过程中出现的问题,不是质粒的污染
14楼2012-04-16 11:43:42
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chchen123

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

15楼2012-06-15 19:36:01
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yixinyuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

从图看同一个质粒酶切的,BamH1 和EcoR1 条带大小是一致的,所以不应该是污染,可能是提取质粒时手法不太小心,导致所提质粒以多种多形态存在,这种情况比较常见。再做一个双酶切看看,应该能说明问题,总的来说质粒的质量还是不太好的。
16楼2012-06-15 22:06:08
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

说不定你的质粒是环套环形成了三连环,四连环的形式,不一定都是二聚啊。一旦切开了就分开了形成一条带。我觉得应该不是杂带污染。
17楼2012-06-16 17:15:27
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pinmingyang

新虫 (初入文坛)

你好,你的条带分的跟清晰,我想知道你的胶浓度是多少??
18楼2014-07-07 11:07:16
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kjxyzxh001: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-07-16 16:45:31
这么纠结   实在不行   重新提一次  看看是自己操作原因还是菌本身的原因
19楼2014-07-07 15:53:08
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